脱钙骨支架材料和人脂肪干细胞复合相容性实验探究

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1、脱钙骨支架材料和人脂肪干细胞复合相容性实验探究【中图分类号】R54【文献标识码】B【文章编号】1004-7484(2013)04-0256-01骨组织工程支架材料首先要有良好的细胞相容性，种子细胞能够在支架材料上粘附并生长［1H2］。骨组织经脱钙处理形成脱钙骨基质，移植无明显免疫排斥反应［3］,有良好的组织相容性。国内外学者将它作为植骨材料进行了大量的实验和临床应用研究。组织工程研究为脱钙骨基质的应用提供了新的思路，即体外分离培养自体细胞，细胞增殖分化后与脱矿骨基质复合，应用于临床修复工作。目前的脱钙骨产品多为异体完全脱钙的骨基质，在本实验中，我们将部分脱钙

2、骨与hADSC：复合，观察部分脱钙骨的细胞相容性。1材料与方法1.1材料及试剂：人脂肪干细胞：由脂肪抽吸组织中分离、培养。部分脱钙骨：由上海组织工程中心提供。3,3'-dioctadecyloxacarbocyanineperchlorate(DiO)MolProbes公司。1.2实验方法1.2.1hADSCs在部分脱钙骨上粘附率的测定将第2代hADSCs按5X105/0.1ml/块的浓度接种于5mmX5mmX3mm部分脱钙骨支架上，共8块，将细胞支架复合物于37°C,5%二氧化碳培养箱中放置4h后，换于另一平皿，加入培养液,将原平皿中加入0.25%胰酶0.

3、02%EDTA,消化收集细胞，计数仪计数，得出流失的细胞量；细胞材料复合物培养24h后,将细胞材料复合物于培养液中轻轻晃动，并换入另一培养皿培养，收集原培养皿培养液，加0.25%胰酶0.02%EDTA于原培养皿中消化收集贴壁的细胞，并与原培养液中细胞一并计数，得出未粘附的细胞数。细胞粘附率二（接种的细胞数-流失的细胞数-未粘附的细胞）/（接种的细胞数-流失的细胞数）。1.2.2ALP定量检测3讨论细胞在材料上的粘附率是评价组织工程支架材料的重要指标，我们检测了人脂肪干细胞在部分脱钙骨上的粘附率。实验结果也表明，人脂肪干细胞能较好地粘附在部分脱钙骨上，在部分脱

4、钙骨的表面及内部孔隙中都能粘附，并能正常生长。符合骨组织工程支架材料的基本要求。人脂肪干细胞与部分脱钙骨的粘附率为96%,与Kasten的研究结果相符合。ALP是成熟成骨细胞标志酶之一，通过检测成骨的重要指标ALP表明，对成骨诱导的hADSCs在三维立体培养环境下ALP仍呈上升趋势，14d达高峰，随后下降。表明细胞在支架材料上三维诱导培养时仍表达成骨细胞表型，体外实验支持成骨。参考文献：[1]Li,H.，Dai,K.,Tang,T.，etal.Boneregenerationbyimplantationofadipose-derivedstromalcell

5、sexpressingBMP-2・BiochemBiophysResCommun,356：836-842,2007.[2]王坷裴国献陈滨金丹魏宽海任高宏•珊瑚经基磷灰石的细胞相容性实验研究.中华创伤骨科杂志，2002,4：278-280.[3]杨维东，彭品祥，马振国，曹建广，刘宝林，王永海•异体脱矿骨修复创伤性眶底缺损.实用口腔医学杂志，1994,10(3)：175-177.