黄连属药用植物rapd鉴定与亲缘关系分析

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1、EnglishAbstractsthemedicinalplantsofCoptisgenus。discussthegeneticrelationshipamongspecies，assessthegenuinenessofChuanhuanglianandprovidescientificevidenceforclassificatjonandfurtherstudyatmorphologic．chemicalandmolecularbiologicallevel．Keyword：medicinalPlantsofCoptis

2、genus；ChuanhuangIianRAPD；centralcompositedesign(CCD)dentification；geneticrelationship；HPLC5前言黄连为名贵中药，我国入药已有两千多年的历史，《神农本草经》列为上品。《蜀本草》中最早描述了黄连原植物的形态：“苗似茶，丛生，一茎三叶，高尺许，凌冬不凋，花黄色。”《图经本草》日：“苗高一尺以来，叶似甘菊，四月开花，黄色，六月结实似芹，子色亦黄。二月八月采根用，生江左者根若念珠，其苗经冬不凋。叶如小雉尾草，正月开花作细穗，淡白微黄色。六七月根紧，始

3、堪采。”唐·苏恭日：“蜀道者粗大，味极浓苦，疗渴为最。江东者结如连珠，疗痢大善。”昧苦、性寒、入心、肝、胃、大肠经，功能清热燥湿、泻火解毒。具有抗菌、抗病毒、抗溃疡、抗炎、强心、降糖等药理活性，被广泛应用于临床治疗泄泻痢疾、中耳炎、急性扁桃体炎、百日咳、大叶性肺炎、流行性脑脊髓膜炎、胆囊炎等疾病。中药材黄连为毛莨科黄连属植物黄连CoptischinensfsFranch．及其同属植物的干燥根茎。《FI本药局方》还收载了日本黄连Coptis』盘ponicaMakino．，同时，我国各地还有多种栽培或野生黄连如三角叶黄连f幽』toi

4、deaC．Y．ChengetHsiao、云南黄连cteetofdesc．Y．Cheng、峨嵋野连Comefensis(Chert)C．Y．Cheng、西藏黄连CteetaWall．及线萼黄连elinearisepalaT．Z．WangetC．k．hsieh等作为药用。RAPD(RandomAmplifiedPolymophicDNA，随机扩增多态DNA)技术，是美国的williams[11和Welsh[2I两个研究小组于1990年同时提出的一种遗传标记技术。RAPD技术建立在PCR(PolymeraseChainReaction

5、)技术基础上，它以任意序列的寡核苷酸单链(通常为10个碱基，AP-PCR则为20～30个碱基)为引物，对所研究的基因组DNA进6行随机扩增，寻找多态性DNA片断。willJams等【lJ已证明这种短的随机引物可用于扩增从低等到高等各种生物的基因组DNA，并且证明这种多态性是按孟德尔方式遗传的，因而可以用此作为遗传标记。RAPD自从问世以来，在植物分类、中药材鉴定、道地药材研究、遗传作图等方面得到了广泛的应用。黄连属药用植物的分类与鉴定目前主要是依据形态学的特征，本文应用RAPD技术构建黄连属药用植物物种的基因组指纹图谱，研究种间

6、与居群的DNA变异，从而揭示物种的亲缘关系，为该属物种鉴定及系统学研究提供DNA分子水平的证据。道地药材的形成是由基因型和环境饰变等因素共同作用的结果，具有形态特征、遗传特征、药效特征等，但在形态和生药性状上差别往往不太明显，而遗传特征是道地药材最重要的特征。近年来，我国学者对黄连的化学成分及药理学有较多的研究报道，本文从分子水平比较了川黄连DNA分子的多态性，揭示了川黄连的遗传特征，为JIl黄连的道地性、遗传育种、GAP种植提供了基础资料。第一部分原植物形态一、黄连CoptischinensisFranch．多年生草本，高20

7、～50cm。根状茎细长柱状，常有分支成簇生长，形如鸡爪，全长3～9cm，直径3～lOmm，表面粗糙，上部多残留褐色鳞叶，节多而密，生有极多须根，两节之问的节间伸长成细而光滑的圆柱状，俗称“过桥杆”或“跳杆”：外皮黄褐色，折断面皮部红棕色．木部金黄色，味极苦。叶基生，叶柄长5～16cm，叶片坚纸质，卵状三角形，长3～8cm，宽2．5～7cm，三全裂，中央全裂片有细柄，卵状菱形，羽状深裂，边缘有锐锯齿，侧生裂片无柄，不等的二深裂。花葶l～2条，高12～25cm：项生聚伞花序，花3～8；总苞片通常3，披针形，羽状深裂，小苞片圆形；萼片

8、5，黄绿色，窄卵形，长9～12．from；花瓣线状，披针形，长5～7mm。中央有蜜槽；雄蕊多数，长3～6mm，外轮雄蕊比花瓣略短或近等长；心皮8～12，离生，有短柄。瞢荚果6～12，长6～8mm，具细柄。(图1．1)二、三角叶黄连口de／toideaC．Y．Oh