三株海洋真菌活性次生代谢产物及其碱调节研究

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1、中国海洋大学博士学位论文三株海洋真菌活性次生代谢产物及其碱调节研究姓名：王俊锋申请学位级别：博士专业：药物化学指导教师：朱伟明201206．三株海洋真菌活性次生代谢产物及其碱调节研究-三株海洋真菌活性次生代谢产物及其碱调节研究摘要海洋真菌是活性海洋天然产物的重要来源。由于海洋真菌生活在寡营养，弱碱的海水环境中，可能形成独特代谢机制，产生有别于陆生真菌的次生代谢产物，近年来逐渐成为研究的热点之一。为了寻找海洋来源真菌中的“瞄entedStrains”和结构新颖的活性代谢产物，本论文对分离自南海直针小尖柳珊瑚讹rfcP砌口6甩D朋口胁、海南文昌头苑红树植物海漆及cDPc口，_妇昭口肋c

2、砌根部样品和东营黄河入海口滩涂植物蒙古鸦葱＆D厂zD”P，．口研D删，fc口三种不同海洋来源样品中分得的真菌，通过化学和生物学相结合的筛选模式，从中获得3株海洋来源“TalemedStrajns”；对这3株“1mentedstrains”进行系统的次生代谢产物研究，并选择其中的一株“1’alenteds们ins"进行了碱胁迫发酵培养的初步研究。取得的主要研究成果有：1．海洋天才真菌的筛选。从实验室菌株库提供的10株海洋来源真菌为筛选对象。以MCF．7肿瘤细胞增殖抑制、抑菌和抗炎试验作为生物活性筛选模型，TLC薄层色谱和HPLC指纹图谱作为化学筛选模型，采用生物活性和化学评价相结合的

3、集成筛选模式，最终获得3株海洋“TalentedstI缸ns”，并对3株“1砒entedstrains"碱胁迫发酵培养条件进行探索研究。2．对3株海洋“Talenteds仃ajlls”次生代谢产物进行系统研究。包括对“T甜entedStrains”进行发酵条件摸索，如培养基、发酵天数、碱源及盐度等，选择最佳培养条件进行大发酵，获得发酵浸膏。通过薄层色谱、硅胶柱色谱、SephadexLH．20柱色谱、反相高效液相色谱等分离方法，从3株海洋天才真菌次生代谢产物中，应用现代波谱技术⋯，IR，NMR，MS，X．Ray等)和化学方法分离鉴定了80个单体化合物的化学结构。其中新化合物23个：从

4、团青霉n，2记f刀f“聊∞埘mz，聆P518撑的代谢产物中获得了12个新的芳香聚酮类化合物(1—12)；从扩张青霉n，?fcf，砌聊￡印口门s“垅091006的代谢产物中得到1个新的没药烷型倍半萜衍生物(25)和1个新的二聚苯酚类衍生物(29)；从互隔交链孢菌彳，fP朋口，．曲口加朋口砌007撑的代谢产物中得到4个新的混源萜类化合物(40-43)。己知化合物的结构类型涉及苯衍生物、混源萜、吲哚生物碱类化合物及核苷等。运用体外生物活性筛选模型，初步评价了单体化合物的肿瘤细胞增殖抑制活性、抑菌活性、抗炎活性、细菌群体感应活性和逆转多药耐药活性等。肿瘤细胞增殖抑制活性测试表明：甲苯酚三聚

5、体类化合物2l_24对HL．60有中等强度的抑制活．三株海洋真菌活性次生代谢产物及其碱调节研究一性，IC50分别为15．7，5．4，18．2和20．8∥M；此外化合物22对肿瘤细胞株A549也有较强的抑制活性，IC50为1．9∥M。抗炎活性结果表明：对单体化合物进行体外NF．加．通路抗炎抑制活性筛选时，化合物4、44和47有弱的抑制活性，IC50分别为45．9、52．0和41．8ⅣM。抑菌活性结果表明：芳香聚酮类化合物4、5、9和12对白色念珠菌具有抑制作用，MIC分别为15．7、16．4、25．8和23．8∥M：化合物1、“、9、12、49-51对大肠杆菌具有抑制作用，MIC分别

6、为10．6、3．9、4．1、17．1、6．4、23．8、14．5、2．9、2．6ⅣM；化合物l、4和6对铜绿假交替单胞菌具有抑制作用，MIC分别为10．6、15．7、17．1∥M；化合物49和66对金黄色葡萄球菌具有抑制作用，MIC分别为28．9、29．1∥M。此外，从一株海洋细菌中发现了5个具有抗鳗弧菌活性小分子化合物(7l一74，77)和1个活性蛋白MMB—l，活性化合物之间可能存在协同作用，能够进一步增强对致病菌的抑菌效果。3．初步研究了碱胁迫对海洋来源真菌次生代谢产物化学多样性的影响。发现不同碱源、不同灭菌步骤对海洋真菌次生代谢产物影响较大。从互隔交链孢菌彳抛聊甜切口加朋口

7、砌007撑碱胁迫发酵产物中分离鉴定新化合物5个(61．65)，证实了碱胁迫培养发酵是增加海洋真菌化学多样性的有效途径之一。综上所述，本文通过对三株海洋“T址entedstrains”和一株海洋细菌活性次生代谢产物的系统研究，获得了80个单体化合物，其中新化合物23个、活性化合物21个；证实了碱胁迫能够增加海洋真菌的化学多样性，产生系列新的活性代谢产物，并为海洋真菌发酵培养策略研究提供了新的思路。关键词：海洋真菌，次生代谢产物，生物活性，碱胁迫．三株海洋真菌活性次生代谢