人羊膜上皮细胞移植用于兔损伤声带组织修复的初步研究

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1、复旦大学硕士研究生论文人羊膜上皮细胞移植用于兔损伤声带组织修复的初步研究Preliminaryresearchontheregenerationofinjuredrabbitvocalfoldsafterthetransplantationofhumanamnioticepithelialcells研究生：王家佳导师：魏春生复旦大学附属眼耳鼻喉科医院2012年4月目录中英文缩写对照1中文摘要2英文摘要3frm4实验流程图8第一部分：声带损伤模型的建立及实验分组9第二部分：人羊膜上皮细胞的分离、培养

2、及生物学标记14第三部分：人羊膜上皮细胞在声带内的存活及分化19第四部分：声带组织学观察24全文总结31参考文献32m35Hi42复旦人学硕lr学位论文中英文缩写对照英文简写英文全名中文名称hAECshumanamnioticepithelialcells人羊膜上皮细胞EGFPenhancedgreenfluorescentprotein增强型绿色荧光蛋白HAhyaluronicacid透明质酸FISHfluorescenceinsituhybridization劳光原位杂

3、交MIFmacrophagemigration-inhibitory巨卩篮细胞迁移抑制因子factorTGF-Ptransforminggrowthfactorbata转化生长因子PIL-10interleukin10白细胞介素-10复口.大学硕士学位论文摘要目的研究人羊膜上皮细胞（humanamnioticepithelialcells,hAECs)移植入兔损伤声带组织内的生长分布特点，探索hAECs促进损伤声带修复再生的潜能。方法分离和培养人羊膜上皮细胞，利用慢病毒载体将增强型绿色荧光蛋白(enh

4、ancedgreenfluorescentprotein,EGFP)基因转染至hAECs内。建立深及声?刃带的兔声带损伤模型，设hAECs移植组即实验组（13侧声带）、损伤对照组(13侧声带）及正常对照组（4侧声带）。荧光显微镜下连续观察hAECs在声带内的存活、分布情况，免疫荧光染色观察hAECs在声带固有层内的分化情况。应用HE染色和免疫组化染色分析胶原纤维、纤维连接蛋白等主要细胞外基质在损伤后3月时的含量及分布。结果hAECs原代培养6d后呈铺路石样生长，移植入兔损伤声带组织后可在固有层内持续存活2个月

5、，细胞呈纵向排列，有趋向性。声带损伤2月时，免疫荧光显示hAECs移植组肌细胞标志蛋白Desmin荧光阳性，提示hAECs向肌细胞分化。光镜观察下见hAECs移植后3个月，兔声带内胶原纤维密度和排布较损伤对照组改善，但未及正常。免疫组化染色示hAECs移植组纤维连接蛋白含量和分布介于损伤对照组和IF.常对照组之间。结论hAECs可在异种动物声带损伤组织内持续存活、生长，并有向声带组织分化的潜能，可促进声带损伤后的修复再生。【关键词】声带；创伤和损伤；人羊膜上皮细胞；移植；异种；细胞移植；兔中图分类号：R767

6、.42复口.人学硕I:学位论文[Abstract]ObjectiveToinvestigatethesurvival,growthanddistributionofhumanamnioticepithelialcells(hAECs)afterinjectedintoinjuredrabbitvocalfoldsandassesstheabilityofhAECstopreventvocalfoldscarring.MethodshAECswereisolatedfromhumanamnionandtheis

7、olatedcellsweretransfectedwithenhancedgreenfluorescentprotein(EGFP)geneusinglentiviralvectors.FifteenNewZealandrabbitswereusedforthisexperiment,hAEC-EGFPwereinjectedintotheleftinjuredvocalfoldsinthirteenrabbits,andthecontralateralthirteenfoldsofthesameanima

8、lexperiencedaninjuredprocedureonly(“injureduntreatedcontrol”)，andfourvocalfoldswereleftasuntreatedcontrols.Thesurvival,distributionanddifferentiationpotentialofhAECswereexaminedbyimmunofluorescencemeth