人脂肪间充质干细胞对肝癌细胞的体外抑制作用

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1、厦门大学硕士学位论文人脂肪间充质干细胞对肝癌细胞的体外抑制作用姓名：任广利申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：王效民2012摘要背景和目的最新报道显示肝细胞性肝癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)位居世界男性恶性肿瘤第五位，女性第七位；在亚洲，因为乙型肝炎病毒(hepatitisBvimS，HBV)的感染率高，一些国家HCC发病率非常高，而西方一些国家由于丙型肝炎患者增多，HCC发病率也逐年升高。我国是HCC的高发国家，发病率居世界首位，死亡率位于恶性肿瘤死亡率的第二位。

2、由于综合治疗疗效不理想，毒副作用大，多数病人诊断后的存活时间通常不超过一年。虽然间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)在人恶性肿瘤的治疗方面的作用目前还存在争议，包括对肝癌进展的不同作用和相关机制都还很不清楚，但MSC还是引起了人们的极大兴趣。本研究的目的就是探讨人脂肪来源的间充质干细胞(adipose．d嘶vedstemcells，ADSCs)对肝癌细胞生长的作用。研究方法分离、纯化、鉴定以及扩增人的脂肪间充质干细胞；倒置相差显微镜观察细胞形态及生长状况；流式细胞术鉴定

3、分离得到细胞的相关表面分子；ADSC上清培养不同肝癌细胞系后，用Brdu法、Edu法和CFSE染色标记检测肝癌细胞增殖情况；加mexiIlV／PI双染标记及TUNEL试剂盒检测肿瘤细胞凋亡；W．estemBlot检测凋亡相关信号通路蛋白分子表达，探讨可能的信号机制。研究结果我们的研究结果显示，分离获得的人脂肪间充质干细胞呈梭形贴壁生长；细胞高表达CDl05、CD90，低表达CD34、CD45。ADSC的培养上清(ADSC．CM)可以有效抑制肝癌细胞的分裂增殖，并通过AKT下游相关信号通路诱导了肝癌细

4、胞的凋亡。研究结论分离获得的人脂肪间充质干细胞可以有效抑制肝癌细胞的增殖并诱导其凋亡。因此，人脂肪干细胞治疗可能为那些肝癌失去手术机会的患者提供新的治疗方法。关键词：人脂肪间充质干细胞；肝癌；凋亡AbstractBackgroundandaimsHepatocellukcarciIlom(HCC)ismefifulmostcommoncaIlcerinmenaIldtheseVenthinwomen．HCCisaSsociatcd谢thhi曲monal时aSaresultofadvancedstag

5、ewhendetectedaIldcancerrecur】rence．EallycaIlcersc锄be协；atedbysu玛icalremovm(resection)，bmthecurrentteclllliquesforsurveillancearenotVe巧goodatdetectillgearlyliVercancerS．Solooking矗)ra11efficientandfeasibleapproaChformepatientswh0caIlnotbeoper{ltedismostim

6、portant．MesenChymalstemcells(MSCs)caIlbeis01ated丘10mbonem舭owandadiposetissue．Cells丘omadipoSetissuehaVesiIIlilarchamcteristicscompared、析thtllose舶mbonem姗w．Butme劬ctionale腩ctofMSCinCludingADSConturnor印wmaIldprogressionare则notcle札nleViewSreportedinHCCareals

7、ocon仃oversial．ThepurposeofthepresentinVestigationist0studythee疵ctsofADSConthegro伽lofHCCcellsandexploretlleunderlyingmechaIlisms．MethodsIIltllisstudy，ADSCswereisolatedIjromhumalllipo嬲piratesandculturediIlplaSticplates．Thepassage3—6cellswereaIlal)，zedonn

8、owcytometer．7nleadipogellicaIldosteogeIlicdia’erentiation嬲saya11dwaSperf．o蛳ed．ConditionedmediumwasharVestedf．romcu№dADSCa船rincubationiIlsemm。行eeDMEMfor24brSandcocultuI．edwimh啪anhepaticcaulcercelllines．Cellproliferation、V嬲meaSuredusingme