兽用抗微生物药物残留质谱筛选方法研究

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1、华中农业大学硕士学位论文兽用抗微生物药物残留质谱筛选方法研究姓名：于洁申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：袁宗辉201206动物源性食品和尿液中抗微生物药物多残留筛选方法研究兽用抗微生物药物残留质谱筛选方法研究研究生于洁导师袁宗辉教授黄玲利副教授国家兽药残留基准实验室(HZAU)／农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学湖北武汉430070中国摘要兽药作为发展现代畜牧业的物质基础，在降低畜禽的发病率与死亡率、促进动物生长、改善动物产品品质和提高饲料利用率方面起到了重要的作用。抗微生物药物是我国使用最广泛的兽药，包括抗生素如p一内酰胺类

2、、四环素类、氯霉素类、大环内酯类、林可胺类、多肽类及泰妙菌素等其他类抗生素、化学合成抗菌药如磺胺类及其增效剂、喹诺酮类、喹嗯啉类及硝基咪唑等其他药物以及抗真菌药和抗病毒药，因此抗微生物药物的残留检测尤为重要。但由于养殖业界一些人士缺乏科学用药的知识，或受经济利益的驱使，不合理用药与非法用药的现象仍很严重，如含p．内酰胺类、四环素类、磺胺类药物等抗菌类药的“有抗奶”问题，猪肉中磺胺类、喹诺酮类药物残留超标等。抗微生物药物残留可使人体中细菌产生耐药性，扰乱人体微生态而产生各种毒副作用如氯霉素可引起贫血灰婴综合征、白血病等，磺胺类药物可引起肾损害，四环

3、素可致心肌损害。现有兽药抗微生物药物多残留检测的分析方法，基质还比较单一，药物种类还不够全面，药物数量还比较少，同时针对多种动物源性食品及代谢物尿液的多类100种以上抗微生物药物的检测分析方法还比较缺乏。因此，本研究针对抗微生物药物多残留检测分析方法的不足，建立了多类动物源性食品中和尿液中lO类120种抗微生物药物的检测的分析方法，为动物源性食品中抗微生物药物的残留检测、食品质量安全评估提供技术支持。建立了猪、牛、羊的肌肉、肝脏和肾脏、鸡的肌肉、肝脏、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、鱼肉、猪尿液动物源性组织中喹喏酮类、大环内酯类、B．内酰胺类、硝基咪唑类、磺胺

4、类、林可胺类、喹嗯啉类、氯霉素类、四环素类和其他抗微生药物原型及其代谢物10类120种抗微生物药物的液相色谱．串联质谱法(LC．MS／MS)。样品前处理采用简单的液．液萃取和固相萃取，液．液萃取采用提取范围比较宽的乙腈作为主要提取溶剂，采用二步提取法，第一步用乙腈作为提取溶剂，提取出大部分药物，第二步采用水提取，提取出水溶性药物，方法简单，溶剂易于取得，固相萃取选择pH范围较广的HLB小柱净化，OasisHLB柱子由于吸附药物pH范围的宽阔性，用于酸性、华中农业大学2012届硕士学位论文中性和碱性化合物，具有杰出的批次间回收率。甲酸甲醇和乙酸乙酯

5、洗脱，甲酸甲醇可洗脱下大部分药物易溶于有机溶剂的药物，乙酸乙酯洗脱一部分脂溶性药物，甲酸甲醇和乙酸乙酯依次洗脱，确保药物全部洗脱下来，初始流动相溶解，LC．MS／MS上样检测，采用C18色谱分离，乙腈．甲酸水色谱分离，所有药物在60分钟内分离、检测。MRM模式下检测，正、负离子同时扫描，每个药物离子在最优的质谱条件下检测。结果显示：各类药物在动物源性食品和尿液中的最低检测限0．5斗g／kg3．0I，tg／kg，最低定量限1．51xg／kg～'10．0lxg／kg，鸡蛋、牛奶、肌肉、肝脏和肾脏中70％药物的平均回收率30％-～50％，一部分药物如头

6、孢类抗生素药物在组织中的回收率会出现低于30％的现象，尿液中药物的回收率86．8％-～99．2％，鸡蛋、牛奶、肌肉、肝脏、肾脏和尿液中的变异系数兰30．O％，符合农业部分析方法的要求。首次建立了动物源性食品和尿液中10类120种抗微生药物多残留的筛选分析方法，检测限低于药物的最大残留限量。检测药物种类和数量多，包括极性强与弱极性的，脂溶性的与水溶性的药物，克服了传统检测方法只能检测单一种类、单一药物或仅仅几类药物的不足。检测的样品基质多，包括猪、牛、羊的肌肉、肝脏和肾脏、鸡的肌肉和肝脏、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、鱼肉和尿液等16种基质，解决了目前检测方法

7、中样品基质单一的问题。样品前处理方法简单，试剂用量少，节约了检测成本和检测时间。方法的检测限和定量限都低于药物的残留限量。本研究可为动物源性食品中抗微生药物残留的监控提供一定的技术支持，对于提高畜产品质量，保障人类健康，保障国际贸易往来，具有很大的实际价值。关键词：液相．串联质谱法，抗微生物兽药多残留，动物源食品和尿液Developaliquidchromatographycombinedwithmassspectrometryscreeningmethodforveterinaryanti-microbialdrugsCandidate：Jie

8、YuSupervisor：Prof．YuanZonghui，A．P．HuangLinliNationalReferenceLaborat