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1、木枣病原真菌抑菌试验研究No.59■48?陕西科技大学J0URNAL0FSHAANXIUNIVERSITY0FSCIENCE8UTECHN0I0GY0ct.2010Vol
2、28文章编号：1000—5811(2010)05—0048—04木枣病原真菌抑茵试验研究刘青，许牡丹,曾令军，刘艳(陕四科技大学生命科学与工程学院，陕西西安710021)摘要:从病变的鲜枣屮分离出两种茵，以4种植物为原料，以抑菌圈直径为指标，对病原茵植物抑菌剂进行了筛选•分别以丁香，良姜，苦参和甘草为原料，用水和70%乙醇做浸提剂，之后分别用水,
3、20乙醇,20甘油为溶剂定容，研究其对青霉和酵母的抑茵效果，同时考察了4种屮草药抑菌效果好的最佳溶剂.结果显示，青霉抑茵效果好的为丁香，甘草提取液;酵母抑茵效果好的为苦参，廿草提取液;醇提抑茵效果好于水提.关键词:木枣;病原真菌;中草药;抑菌中图法分类号:TS201.3文献标识码:A0前言果蔬采后因贮藏温度，湿度不适而极易腐烂变质.木枣由于其质构紧密，含水量少,采后极易酒化变质，采后病害是影响贮藏的重要因素，但由于品种多，贮藏环境不同,因此许多研究了者分离鉴定的致病菌不尽相同•有研究报道鲜枣在生产和贮藏过程屮引起病
4、害的病原菌主要有链格泡菌，拟茎点霉菌，欧氏干菌，梭壳也菌，根菌索菌,根霉菌等口].木试验从木枣贮藏后期分离出致病菌,用可食中草药做抑菌剂，研究了其对木枣病原菌的抑菌效果以及最佳的浸提剂和溶剂.1材料与方法1.1试验材料试验材料:丁香，良姜，苦参，甘草购于西安市未央区景家中西药店.菌种:青霉和酵母菌，在生命学院实验室从病变的鲜枣组织中分离纯化得到.培养基:马铃薯葡萄糖培养基.1.2仪器与设备超净工作台（苏州净化设备有限公司），电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）,电热恒温培养箱（成都红星电烘箱厂），手提式压力灭菌
5、锅（浙江新丰更疗器械有限公司），旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）,BK5000型奥特偏光显微镜（重庆奥特光学仪器有限公司）.1.3试验方法131木枣病原菌的分离1二2]将贮藏过程中发病的木枣病果表面用水清洗，然后切取与病害邻近的4〜5mm见方的组织小块，用体积分数75%的酒精浸泡30s,迅速用灭菌滤纸吸出酒精后移人2的次氯酸钠溶液中浸泡1min,再用*收稿日期:2010-07—16作者简介汶IJ青（1985一），女，陕四省商洛市人，在读硕士生，研究方向:果蔬加工与保鲜基金项目:陕西省科技攻关项0（2008K03—1
6、5）第5期刘青等:木枣病原真菌抑菌试验研究?49?无菌水冲洗3次，用消毒滤纸吸干表而水分，最后将组织小块接在PDA培养基上于25〜28°C下培养3〜5d,当培养出的菌落直径为lcm吋，用接种针挑取菌落边缘菌丝接人另一PDA培养皿上，并于25〜28°C培养.重复上述操作3次，所得菌落即可作为纯化菌种回接果实，如发病症状与前相同,便可作为采后病原菌转接人试管,4°C冰箱保存，作为供试菌种进行进一步鉴定.132木枣病原菌的鉴定根据病害症状，菌落形态及菌丝，沦子等的特征来确定感染木枣的病原真菌.1.4植物粗提物的制备将4种
7、中草药原料粉碎后，过40目筛，分别称取2.0g粉末，用溶剂浸提丁香,良姜,苦参和甘草，于60°C的恒温振荡仪中振荡24h,滤液于旋转蒸发仪减压浓缩，再用不同溶剂定容浓缩液至lOOmL,使最后质量浓度相当于20mg/mL.(1)水提水溶中草药:按粗提物制备方法，用水做溶剂，浓缩后用水定容至lOOmL.(2)醇提水溶屮草药:方法同上，用70乙醇做溶剂，浓缩后用水定容至lOOmL.(3)醇提醇溶中草药:方法同上，用70乙醇做溶剂，浓缩后用20乙醇定容至lOOmL.(4)醇提油溶中草药:方法同上，用70%乙醇做溶剂，浓缩后
8、用20丙三醇(甘油)定容至lOOmL.1.5菌悬液制备将分离纯化的菌种接入平板培养基上，在28°C培养5d,进行活化,然后挑1坏菌放人9mL0.9无菌牛理盐水中，震荡摇匀,制成浓度约为107〜108cfu/mL的菌悬液.1.6抑菌剂筛选取直径为6mm滤纸圆片,放人到抑菌剂溶液中，浸泡30min,取出晾干.用注射器吸取菌悬液0.6mL于平板培养基上，将晾干的滤纸片贴在培养基表面，每皿3片，重复3次，在28°C培养28〜72h,取出测量抑菌圈直径，取平均值,筛选有效的抑菌剂.2结果与讨论2.1病原菌鉴定从贮藏的木枣果实
9、上分离出A,B两种病原真菌，挑取各菌落少许到载玻片上，用显微镜观察，测量，根据各病原菌的形态特征对其进行鉴定.(1)病原真菌A.培养该菌，在PDA培养基上菌落如图1所示，菌落呈圆形，青绿色,粉状霉层菌落，菌落边缘白色.显微镜观察可见分牛泡子梗丛生，量大，小梗为瓶形梗，泡子大小均匀,近球形或椭圆形.细胞形态在400倍光学显微镜下观察如图2所示,根据以上特征及文
