桑叶降血糖有效组分的提取分离纯化工艺研究

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1、江苏大学硕士学位论文桑叶降血糖有效组分的提取分离纯化工艺研究姓名：杨兵申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：欧阳臻2012-06-06江苏大学硕士学位论文摘要桑叶为桑科植物桑黼口跏L的干燥叶，具有清肝明目、疏风清热之功效。古代有记载桑可用于治疗消渴症，即现代的糖尿病。近年来，桑叶的降血糖活性受到众多学者的广泛关注和研究。本课题组前期已对桑叶中降血糖活性的物质进行了系统研究，其降血糖有效组分主要为多糖、黄酮和生物碱类成分。本论文研究了不同季节桑叶中1．脱氧野尻霉素(DNJ)、总黄酮、芦丁和多糖含量的变化规律。采用现代提取分离技术对桑叶总黄酮和生物碱的提取分离

2、纯化工艺进行研究。运用现代分析技术对生物碱部位中的主要成分进行了分析。主要研究内容和结论如下：l、建立了DNJ、芦丁、总黄酮及多糖的含量分析方法。建立了柱前衍生化．高效液相色谱紫外检测法分析桑叶中DNJ含量；高效液相色谱紫外检测法分析桑叶中芦丁的含量；紫外分光光度法分析桑叶中总黄酮和多糖的含量。方法快速、灵敏、准确。系统研究了不同生长季节桑叶中DNJ、芦丁、总黄酮和多糖的含量动态变化。结果表明，不同生长季节的桑叶中DNJ、芦丁、总黄酮和多糖的含量均有一定差异，且4种成分的变化趋势各有差异。桑叶中DNJ含量在7、8月份最高，达到0．27％。总黄酮含量变化趋势同

3、芦丁一致，即从4月开始下降，6月下旬后升高，经霜后含量显著升高，11月份含量最高。多糖含量从4月份开始逐渐升高，到10月中旬达到2．32％，之后持续下降，尤其是在11月中下旬含量急剧降低。2、研究了桑叶总黄酮的提取分离纯化工艺。以桑叶总黄酮得率为指标，考察了乙醇浓度、提取温度、提取时间、提取次数和料液比对总黄酮提取效果的影响，优选出桑叶总黄酮最佳提取工艺为：20倍生药量的60％乙醇100℃提取2次，每次2．5h。以树脂对总黄酮吸附量为考察指标，对树脂进行筛选，得到树脂V的吸附性能最优。研究了树脂的静态吸附性能，树脂对桑叶总黄酮的静态吸附容量为18．70Ing

4、信湿树脂，静态解吸率为92．73％。考察了树脂的动态吸附性能，树脂的动态吸附容量为16．49mg鹰湿树脂，动态解析率为92．78％。桑叶总黄酮最佳分离纯化工艺为：上样量1：3(树脂：生药量)，树脂吸附流速6BV／h，乙醇浓度为60％，桑叶降血糖有效组分的提取分离纯化工艺研究60％乙醇洗脱体积为3BV。经两步纯化后得到总黄酮部位中总黄酮的含量能够达到50％以上。3、研究了桑叶生物碱的提取分离纯化工艺。采用单因素实验和正交实验，以DNJ得率为考察指标，优选出桑叶生物碱的最佳提取工艺：16倍量蒸馏水100℃提取3次，每次1h。DNJ得率为1．76mg偿。采用离子交

5、换树脂对桑叶中D卜U提取物进行分离和纯化。确定生物碱最佳纯化工艺为：001×7阳离子交换树脂上样量1：3(树脂量：生药量)，树脂吸附流速3mL／珈Iin，氨水浓度0．5mol／I。氨水洗脱体积6倍柱体积(6B、厂)；201×4阴离子交换树脂上样量1：3(树脂量：生药量)，树脂吸附流速4m【／min。通过最佳纯化工艺得到DNJ纯度大于50％的桑叶总生物碱部位。4、桑叶生物碱部位主要成分分析及总生物碱含量测定。采用液．质联用技术(LC．MS)对桑叶总生物碱部位中主要成分进行分析，鉴定了6个主要的活性成分的结构，其中5个多羟基生物碱：DNJ、fa90mine、3-

6、印i-fa90mille、Ⅸ姬、CalystegineB2，1个多羟基生物碱糖苷：2．O．p．Glc一Ⅸ幅。柱前衍生化卸?LC—UV法测定桑叶生物碱部位中总生物碱的含量，流动相为乙腈．0．1％醋酸(50：50，VⅣ)，最低检出限为3．3ng，标准曲线为Y=13458X一4708．1(相关系数r=0．9999)，线性范围为31．75—508陷／mL，平均回收率为98．68％，测得样品的总生物碱平均含量为76．87％；柱前衍生化}玎}LC．FP法测定桑叶生物碱部位中总生物碱的含量，流动相为乙腈．0．1％醋酸(50：50，VⅣ)，最低检出限0．4ng，回归方程为Y

7、=33301X+3312．4(相关系数r=0．9999)，线性范围为31．75—508耀r／mL，平均回收率为99．02％，测得样品的总生物碱平均含量为76．70％；雷氏盐比色法测定桑叶生物碱部位中总生物碱的含量，标准曲线为Y=0．2845X+o．1297(相关系数r=0．9992)，线性范围为0．8585—2．9189Ing／mL，平均回收率为94．15％，测得样品的总生物碱平均含量为70．64％。关键词：桑叶，总黄酮，DNJ，提取，分离纯化Ⅱ江苏大学硕士学位论文kav骼of胁傩口跏L．∞mes舶mmepl觚tof胁腓口加LIIlTCM，meleaves0

8、f肘ar淞口距尥Lhavebeenuscdfor仃e