植物组培实验报告-高睿

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1、不同激素配比对烟草叶片外植体分化的影响摘要：培养基是调控烟草叶片外植体分化途径的一个重要因素，•以不同激素配比的培养基比较其对烟草叶片外植体分化的影响，研究不同激素浓度配比对外植体分化的影响。实验结果表明：在NAA/6-BA激素配比中，MS+NAA(O.5mg/L)+6-BA(1.5mg/L)为出芽最优培养基；在IAA/6-BA激素配比中，MS+IAA(Omg/L)+6-BA(2.0mg/L)是最优生根培养基。得出一结论：当NAA浓度低时(即6-BA浓度高时)有利于芽的分化，当IAA浓度高时(即6-BA浓度低时)有利于根的分化。关键词：激素配比，烟草叶片，外植体，愈

2、伤组织-1^1—刖F烟草(Nicotianatabacum)属茄科烟草属的一年生草本植物，原产于美洲和大洋洲。烟草作为重要的经济作物和工业原料作物，具有药用、工业用、保健美容等价值，不仅对国民经济的发展起着重要作用，而口作为模式植物在植物研究中得到广泛应用。目前，烟草一般采用有性繁殖，但繁殖的烟苗不均衡，易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，从而影响经济收入。而通过组织培养技术，可以保持烟草优良品种的优良性状，减少病虫害，从而达到高产优质的冃的124刃。由于其易进行组织培养得到再生植株，被广大学者誉为植物组织培养的理想植物，也是研究植物细胞分化和脱分

3、化的理想材料，故此烟草在植物组织分化研究中占据了重要的地位。激素是植物组织培养的关键因素，调节激素水平和配比，已成为提高组织分化频率的有效手段，人们利用植物愈伤组织研究激素调节工作已有许多报道267J。但在具体试验中，激素的种类、浓度和配比，十分错综复杂。因此，在实际试验中需对培养条件进行筛选，以求得最适激素种类、浓度和配比。本实验以烟草叶片组织为外植体进行组织培养，主要研究不同植物激素配比的MS培养基上烟草愈伤组织诱导的情况。材料方法1实验材料无菌烟草苗叶片2实验试剂MS培养基母液，NAA,6-BA,IAA,70%乙醇，Imol/LNaOH,1mol/LHCL3实

4、验仪器超净工作台，高压灭菌设备，手术剪、长柄剪子，解剖刀，酒精灯，电子天平，无菌吸水纸，标签纸，记号笔，烧杯，培养皿，三角瓶，线绳，，封口膜，移液抢等。4实验设计表1不同激素配比编号激素配比1组2组NAA(mg/L)6-BA(mg/L)IAA(mg/L)6-BA(mg/L)102.002.020.51.50.51.531.01.01.01.041.50.51.50.552.002.00备注MS培养基做对照，每组重复3次，共33个培养皿。5试验方法(1)MS培养基配制取一个大烧杯，加入一定量的水，再分别加入四种MS培养基母液、蔗糖30g/L,琼脂7g/L,进行加热溶解

5、。用蒸偲水定容至1000ml,再用1mol/L的NaOH和HC1将pH调至5.8。将培养基平均分装入10个100ml三角瓶内，贴上标签。(2)将培养基放入高压灭菌锅,0.11Mpa,l2TC下灭菌20min。(3)接种a、接种前打开超净工作台紫外灯照射30min,Z后关闭紫外灯打开送风开关并通风lOmin；b、用70%乙醇溶液擦拭超净工作台台面和手，将培养基及接种工具放入超净工作台台面两侧；c、根据实验设计表1植物激素配比添加激素，倒板(超净工作台下进行);d、取无菌烟草苗的嫩叶片作外植体。将无菌烟草叶片放入无菌碟子中，每片叶子用解剖刀切去边缘后再切成5mm见方小块

6、,在火焰上方接入到各个培养基中，每个培养皿中可接种3・4个小块（超净工作台下进行）；e、将各个培养基贴上标签，放到培养室中培养。（4）进行实验观察记录，并照相。实验结果经过30天的观察，对不同的激素配比外植体的发育情况进行了1•愈伤组织分化的形态发生接种培养1周后，培养基内的叶片边缘慢慢上卷，叶片外植体明显膨大，培养2周后，切口边缘处形成淡绿或浅黃色的愈伤组织，；愈伤组织首先发生在叶片边缘，为淡绿色颗粒状，随着进一步培养，出愈伤不断加大。但多是叶片边缘形成的愈伤不断扩增，叶片中央形成少量愈伤。培养3周后，形成大块的，质地紧密的浅绿色半透明的愈伤组织，并且愈伤组织上岀

7、现绿色芽点。再继续培养至30天，进行观察。2•激素对愈伤组织分化的影响本实验以MS培养基为对照，对3种激素设置了两种组合，每种激素组合含5个浓度配比，每组处理3次重复。2・1在MS对照培养基上，叶片慢慢变黄，枯萎至死，未形成愈伤组织（图1）。图1MS对照培养基2.2在第1组NAA与6-BA激素配比中，叶片外植体均产生了愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。其中，编号1号和2号培养基中，愈伤组织诱导分化出茎芽，2号培养基诱导分化出的茎芽要多于1号培养基（图2）；3号和4号培养基愈伤组织无任何分化，5号培养基其愈伤组织诱导分化出少量的根（图3）。图2A为1号培养基：N