小鼠和山羊性成熟前卵泡发育与雌激素受体表达及其调控研究

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1、山东农业大学硕士学位论文小鼠和山羊性成熟前卵泡发育与雌激素受体表达及其调控研究姓名：王洪进申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：郭慧君20120615山东农业大学硕士学位论文中文摘要动物发育良好的卵子经体外成熟、授精、胚胎培养可获得完整的后代个体，大量的比较研究证实性成熟前一些哺乳动物如小鼠、猪、牛、山羊等卵泡卵子在体外成熟和受精后的发育能力很低，甚至不形成胚胎，这显示性成熟前卵母细胞发育存在缺陷，造成这种缺陷的原因或机制尚不清楚。人们试图通过一些途径或方法如改善培养介质、使用各种刺激等提高性成熟前卵泡发育的潜能，一直未达到预期效果，这显然制约对性成熟前雌性动物卵泡卵子的利用，成为

2、动物克隆、胚胎移植工程中的关键科学问题和技术难题。针对上述科学问题，本研究以小鼠、沂蒙黑山羊、波尔山羊为动物模型，以性成熟的卵巢卵泡为对照，使用连续组织切片技术、脏染色技术、免疫组织化学方法、放射免疫技术、荧光定量RT-PCR等技术设计了一系列的科学试验，探讨了卵巢卵泡发育、雌激素分泌和Q、B两种雌激素受体表达性成熟前后的差异规律：另外，研究了使用外源性激素E：、FSH和LH处理对性成熟前小鼠卵泡发育、雌激素分泌及其受体表达的影响，为探索改善卵泡发育潜能的途径和方法提供科学依据。实验结果表明：1．小鼠血液雌激素在性成熟前(25d)较低，而性成熟(32d至38d)极显著升高(P

3、，且维持较高的水平：随日龄增加，小鼠卵巢卵泡发育渐至成熟，其内Q型雌激素受体●和B型雌激素受主要分布于颗粒细胞内，呈现不同的表达规律：性成熟前’Q型受体表达极少，到性成熟后显著升高(P<0．01)；B型受体性成熟前大量表达，较a型受体多，性成熟后略有降低。2．沂蒙黑山羊和波尔山羊性成熟前卵巢皮质较薄，原始卵泡和初级卵泡数量多，发育不充分，细胞结构较完整，形态小，成熟卵泡很少；性成熟卵巢和卵泡发育良好可见明显的黄体结构，初级卵泡、次级卵泡丰富，成熟卵泡较多。性成熟前波尔山羊和沂蒙黑山羊卵巢Q、B雌激素受体表达均低于性成熟卵巢内的表达；且无论性成熟前还是性成熟卵巢，a雌激素受体的表达均显著低

4、于13雌激素受体。3．经E：、FSH和LH处理的20日龄小鼠可以不同程度增加卵泡的数量，经FSH和LH处理的小鼠优势卵泡数量较多，排卵提前；经三种激素处理后卵泡内Q、13两种雌激素受体阳性颗粒细胞增多，其中FSH和LH对Q雌激素受体增加显著，优势卵泡内颗粒细小鼠和山羊性成熟前卵巢卵泡发育与雌激素受体表达及其调控研究胞增加显著；雌激素分泌在三种激素作用下变化不一致，其中FSH和LH具有促进内源性雌激素分泌的作用，而外源性雌激素有降低内源性雌激素作用的趋势。结论：小鼠和山羊研究证实性成熟前卵泡雌激素受体表达较性成熟低，这可能是卵泡卵子发育潜能低下重要原因之一；使用合适的调控处理方法可以改善性

5、成熟前小鼠卵巢卵泡的发育与卵泡内Q、13雌激素受体的分布、表达，对探索提高性成熟前动物卵泡发育潜能的途径和方法提供科学依据。关键词：卵巢卵泡；雌激素受体：性成熟前；发育潜能低下II山东农业大学硕士学位论文AbstractTheanimal’Swell—developedoocytesbyinvitromaturation，fertilization，embryocultureareavailabletocompletethedescendantsofindividuals．Alargenumbersofcomparativestudiesconfirmthatprepubertalmam

6、malssuchasmice，pigs，goatsandcattleetal，oocytesdevelopmentalcompetenceafterinvitromaturationandfertilizationisverylow,evenisnottheformationofembryonic．Thisshowsthattheprepubertaloocytesdevelopmentdefects，thecauseormechanismofthisdefectisunclear．Manytechnichesormethodsincludingdifferentculturemediu

7、msandmanystimulihavebeenconductedtoimproveprepubertalfollicledevelopmentalcompetence．Ithasnotachievedthedesiredeffect，whichisobviouslyrestrictingtheapplicationofprepubertalfemaleanimaloocytesandiskeyscientificissuesand