小鼠发育过程脑组织内topoⅱβ的变化

《小鼠发育过程脑组织内topoⅱβ的变化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文小鼠发育过程脑组织内TopoⅡβ的变化姓名：王景伟申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：曹翠丽201203中文摘要小鼠发育过程脑组织内TopolI[I的变化摘要目的：TopolI[3与神经细胞的发育、分化有关。本研究通过观察胚胎时期、出生后的幼鼠及腹腔给予TopolI抑制剂后，脑组织内nestin、GFAP、p-mbulinlII和TopolI[3的表达情况，探讨神经干细胞向神经元及神经胶质细胞分化时，TopolI[3所发挥的作用。方法：选择由河北医科大学实验动物中心提供健康成年昆明鼠，雌

2、鼠30只，雄鼠15只，12周龄，清洁级。分别取成年昆明鼠，雌鼠2只，雄鼠1只，于晚上20点合笼。次日上午8点前，取雌鼠观察是否有阴道栓，有阴道栓者记为E0d，幼鼠出生当天记为Pld。1、正常组动物标本制备取E18d孕鼠、Pld、P7d、P14d、P28d幼鼠，剥离脑组织，浸泡于4％多聚甲醛溶液进行固定，4℃保存。2、实验组动物标本制备取E18d孕鼠2只，P28d幼鼠4只，按4mg／kg注射依托泊苷注射液，分别于注射后12小时，24小时，按常规取出胎鼠、幼鼠，剥离脑组织，浸泡于4％多聚甲醛溶液进行固定，4℃保存。3、光镜标本制备：

3、常规石蜡包埋，连续性石蜡切片，片厚5I-u'n。常规HE染色、甲苯胺蓝染色，免疫组化(nestin、GFAP、p．tubulinlII和TopolIl3)染色，DAB显色，免疫双标，脱水、透明、封片。显微镜观察、照相。4、统计学处理：阳性细胞采用专业图像分析软件Image．ProPlus6．0测定平均光密度值。用sspsl3．0软件进行分析，所得数据用均数加减标准差(．&s)表示。采用SNK-q检验，进行两两比较，以P<0．05为有显著性差异。结果：1、HE染色的结果观察：E18d，小鼠大脑皮质的六层结构已基本形成。而SVZ区和

4、海马形态上还在发生变化。E18d时，小鼠的SVZ区已经初步形成，细胞呈多层排列，外侧部明显厚于内侧部，细胞形态呈立方形，细胞核圆形或椭圆形。中文摘要以后SVZ区的变化主要是细胞层次逐渐减少。至P28d，仅SVZ区外上角仍为多层。E18d，可见海马原基是由皮质向深层卷曲形成。随着脑组织的发育，海马结构形成了阿蒙角与齿状回等结构，逐渐与大脑皮质分离，中间隔以胼胝体，至P28d，海马形态基本形成，形成最终的三层细胞结构。2、甲苯胺蓝尼氏染色所观察到的结果与HE染色一致。3、免疫组织化学观察3．1TopoIIl3免疫阳性细胞：正常组E1

5、8d阳性细胞主要分布在大脑皮质，细胞体积较小，分布集中，其平均光密度值为0．3347+0．0874，SVZ区和海马仅可见散在的阳性细胞分布。Pld．P28d，TopolI[3免疫阳性细胞还是主要分布于大脑皮质，但总的趋势是数量减少。Pld的平均光密度值为0．2836+0．0626，P7d的平均光密度值为0．2518+0．0308，P14d的平均光密度值为0．2264士0．0299，P28d的平均光密度值为0．1848+0．020I。SVZ区内阳性细胞变化不明显，在P7d．P28d海马内的阳性细胞明显增多，阿蒙角和齿状回内均可见大

6、量TopolIp阳性细胞。各组之间比较结果显示有显著性差异(尸<0．05)。实验组：注射依托泊苷注射液组，TopolIp免疫阳性细胞的分布与正常组的分布一致，E18d注射依托泊苷注射液12小时组，平均光密度值为O．3051士0．0561，注射依托泊苷注射液24小时组，平均光密度值为0．3048士0．0462，实验组TopolIp免疫阳性细胞减少，与正常组比较结果显示有显著性差异(P

7、士0．0261。P28d实验组与正常组TopoIIp免疫阳性细胞变化不明显，比较结果显示没有显著性差异(P>O．05)。3．2nestin免疫阳性细胞：正常组，E18d阳性细胞主要分布在大脑皮质，SVZ区可见散在的阳性细胞分布。Pld．P7d，免疫阳性细胞还是主要分布于大脑皮质，但总的趋势是数量逐渐减少，P14d．P28d在大脑皮质只可见一些散在的阳性细胞分布。实验组，E18d注射依托泊苷注射液12、24小时组阳性细胞均明显增多。P28d注射依托泊苷注射液12、24小时组与正常组没有明显区别。中文摘要3．3GFAP免疫阳性细胞：

8、正常组E18d未见阳性细胞，Pld，免疫阳性细胞主要分布于脑膜，P7d．P28d除脑膜外，大脑皮质也可见阳性细胞，在吻侧迁移流(Rostralmigratorystream，RMS)，出现了明显的阳性细胞。实验组，E18d注射依托泊苷注射液12、24小时组均出现