新城疫病毒对hu-pbl-scid小鼠食管癌移植瘤治疗作用的研究

《新城疫病毒对hu-pbl-scid小鼠食管癌移植瘤治疗作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文新城疫病毒对Hu--PBL--SCID小鼠食管癌移植瘤治疗作用的研究姓名：庞敏红申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：张进顺；刘开扬201203中文摘要新城疫病毒对Hu．PBL．SCID小鼠食管癌移植瘤治疗作用的研究摘要目的：将人的免疫细胞注射给重症联合免疫缺陷(SevereCombinedimmunodeficientmice，SCID)d'鼠，重建实验所需免疫环境，建立人外周血淋巴细胞Hu．PBL．SCID小鼠移植瘤模型；观察新城疫病毒(Newcastledisea

2、sevirus，NDV)对体内肿瘤的生长抑制作用及免疫调节作用；研究NDV在Hu．PBL．SCID小鼠体内移植瘤环境中诱导肿瘤细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达情况；比较NDV对食管癌细胞的选择性杀伤作用及体内应用的高效性、安全性及可行性。为将NDV应用为抗肿瘤疫莆研究及临床实验提供科学的数据。方法：1密度梯度离心法分离人外周血淋巴细胞(humanperipheralbloodlymphocytes，PBL)，每只SCID小鼠接受腹腔内注射2×107个PBL，建立人免疫系统；免疫比浊法检测SCID小鼠外周

3、血人IgG含量。2用含10％胎牛血清的RPMll640培养基常规传代培养人食管癌Ecal09细胞株。生物倒置显微镜观察培养过程，将对数生长期细胞制成5×107／ml悬液。3抽取0．1ml配制好的食管癌Ecal09细胞悬液，在SCID小鼠右腿内侧皮下注射，每只小鼠设1个皮下接种点，接种约5×106个食管癌对数生长期细胞。4成功建立Hu．PBL．SCID小鼠食管癌移植瘤模型，对其免疫学特性进行检测。将Hu．PBL．SCID小鼠食管癌移植瘤模型分组为单纯注射PBS的Ecal09．PBS组、NDV治疗的Ec

4、al09．NDV组、5-FU治疗的Ecal09—5FU组和空白组即Ecal09一Free组。5对各组小鼠的治疗进行观察，28天处死小鼠，监测其体重、肿瘤体积，称量瘤重、脾重，并计算抑瘤率和脾脏指数，进行毒性评价；取SCID小鼠肿瘤组织、胸腺和脾脏，固定、切片，HE染色，病理观察分析：免疫组化检测Bax、Bcl．2蛋白表达情况；提取Hu—PBL—SCID小鼠肿瘤组织的中文摘要DNA进行DNA．1adder实验，检测细胞凋亡，探讨NDV在Hu．PBL．SCID小鼠模型体内杀伤食管癌细胞的抗肿瘤机制。结果

5、：成功建立Hu．PBL—SCID小鼠食管癌移植瘤模型，并进行了长期的传代与观察，同时对其免疫学特性进行了检测。1用免疫比浊法检测SCID小鼠外周血人IgG含量，Ecal09一PBS组、Ecal09．NDV组和Ecal09．5FU组均比Ecal09．Free组明显增高，有显著性差异(p<0．05)，表明人外周血淋巴细胞SCID小鼠体内移植及人免疫建：立成功。2白细胞计数结果显示Ecal09．NDV组和Ecal09．PBS组相比无显著性差异(p>0．05)，Ecal09．5FU组和Ecal09．PBS组

6、比较，差异具有统计学意义@O．05)，Ecal09．5FU组和Eca

7、l09一PBS组比较有显著性差异(p<0．05)。6病理切片HE染色，镜下观察可见，Ecal09．PBS组肿瘤细胞个体较完整，死亡区域少，范围较小，细胞大小均匀，胞核密集，染色清晰，核膜完整，可见核仁，胞浆清亮、胞质边界不明显，细胞分裂相多；Ecal09．NDV组肿瘤细胞可见成片状死亡区域，范围较大，整体的形态模糊，核大小不等、核固缩明显，核仁消失，核膜溶解，胞浆不清亮，胞质边界不清，细胞分裂相较少，细胞滞长；Ecal09．5FU组肿瘤细胞死亡范围较大，亦见大量成片状死亡区域，核大小不等，核固缩，胞

8、浆较多不清亮，颜色较浅，胞质界限模糊。Ecal09一NDV组和Ecal09．5FU组均显示肿瘤细胞大量死亡。7各组SCID小鼠的胸腺、脾脏组织病理切片，HE染色结果观察均未发现有明显的病理改变。中文摘要8免疫组化Bax、Bcl．2蛋白表达结果，Ecal09．NDV组中Bax的表达高于Ecal09．PBS组，差别具有统计学意义0O．05)。9琼脂糖凝胶电泳DNA．1adde