玉米叶序调控相关基因zmedp的克隆及功能研究

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1、安徽农业大学硕士学位论文玉米叶序调控相关基因Zmedp的克隆及功能研究姓名：李艳华申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：程备久201206摘要对生叶序玉米是一个新的变异类型，其特征是在茎秆的同一节点生长两片对生叶片，是发育生物学研究的重要遗传资源。本研究以三组对生玉米、互生玉米近等基因系为材料，通过基因芯片的方法寻找并得到可能是调控叶序发生的候选基因，我们将其命名为Z?l如勿。通过删a妇过量表达载体和干涉表达载体进行遗传转化，并采用ELISA的方法比较野生植株和z拖咖转化植株进行细胞分裂素和生长素的含量，同时分析了水稻同源基

2、因仍e咖，获得了如下结果：1、通过R1’-PCR获得幻庇咖的全长，并构建了过量表达载体和干涉表达载体。通过原位转化获得了z讹勿的过表达转基因玉米和干涉表达转基因玉米植株，通过PCR筛选出干涉转基因植株。2、通过半定量的方法，我们对刎bdp进行组织特异性表达分析。结果显示z旒dp基因在根、茎、叶以及茎尖均有表达；在茎尖表达最强烈，其次是根，再次是茎，在叶片中表达量最少。3、构建了p1302．删edp．mGFP融合表达载体，并通过基因枪法轰击洋葱表皮细胞，进行亚细胞定位分析，结果显示删．edp与GFP载体的融合蛋白定位于细胞核中。4、采

3、用ELISA的方法比较对照玉米植株和转基因玉米植株中细胞分裂素和生长素的含量差异，结果表明：在转基因干涉植株中细胞分裂素含量降低，而生长素含量升高。这说明勿4砌对细胞分裂素和生长素的合成有作用，在玉米的研究中尚未有过对该基因的报道，是一个新的调控内源激素的基因。5、通过NCBI找到删a咖再水稻中的同源基因傀e劫，选取300bp作为干涉片段，通过RT-PCR获得，并构建了干涉表达载体。再通过农杆菌介导的方式，获得了干涉表达的转基因水稻植株。通过PCR筛选出转基因植株。关键词：玉米，叶序，对生，过量表达，RNA干涉Abs仃actMaiz

4、e丽mtheoppositephyllotaXyandalsoiIlitiatillgearsiIlo即ositepairsiS觚abe玎硼tmutaIlt．T11eoppositephyllotaXycharacterisanewtypeofphyllota)【ylocationofmaizea11ditisalsoapreciousmat两altomaizebreedillgandpl锄teVolution．MeⅡlodingtllegenecbjp，westIldied娃lediff．erenceofbet、7∞enMaize

5、witllⅡleoppositeandaltemateph姐lota)【yat3-level：H4D／d，BeiD／d，5003D／d．Thegene，仃eannentcalledZmP咖，maycon仃olthedeVelopofMaize、衍tllmeoppositephyllota)【yiIl3-leVelofMaize谢tllnleoppositealldaltematephyllo协Xy．Tlleresearchof撇勿geIleaIld伪e咖geIleisbyconsmlctingthem01ecularregulati

6、onofoVereXpressionvectora11dRNAiexpressionVector．Andweselectedinbreedlinesincludedwildmaizeand仃．觚sgeIlicmaize，comparedtheelldogenesishomonebyEUSAmethod．Resultsarefollows：1．ARer勿钯勿gellewas0btainedbyRT-PCR，meoverexpressionvectoralldRN加expressionVectorof删匆勿genewerecons咖ct

7、edaIld仃ansfomedintomaizemediatedbyA伊0bact甜um．FinallytransgenicmaizeforZMa勿oVereXpressionandRNAiwerepickedoutbyPCR．2．wbstudiedthetissue—specificexpressioni11刎匆咖byI汛PCRmethod．Theresultshowsthatme勿匏勿geneisespressedinroots，stems，lesVes趾dshoottip．Thes缸．ongestexpressionisinm

8、eshoottip，followedbytlleroot，againisinthestem，ande)【pressioninme1eavescouldhardlysee．3．Todcteminethesubcellularlocali