自噬在巨噬细胞介导的炎症中的作用及其机制研究

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3、的炎症中的作用，并初步探讨其相关机制。方法：第一部分：以Raw264．7巨噬细胞为研究对象，通过LPS建立细胞炎症模型。采用Westemblot法检测TNF．u(tumornecrosisfactor-a)的表达，检验模型是否建立成功；免疫荧光方法观察LC3的荧光聚集；WeStemblot法测定不同时间点自噬相关蛋白LC3(microtubule-associatedproteinlightchain3)、p62及Beclinl的表达水平。第二部分：分别采用白噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin)以及自噬抑制剂3．甲基腺嘌呤(3-methy

4、ladenine3-MA)预处理LPS诱导的巨噬细胞，Westernblot法检测自噬相关蛋白的表达；ELISA检测炎症相关因子TNF．c【、ICAM．1(intercellularadhesionmolecule)及GriessReagen检测NO(nitricoxide)的生成和释放；采用RT-PCR方法检测p62转录水平变化；利用siRNA干扰技术构建敲减自噬底物蛋白p62的细胞模型，同时ELISA检测炎症因子释放水平。结果：第一部分：成功建立LPS诱导Raw264．7巨噬细胞炎症模型，细胞免疫荧光结果显示LPS刺激12h后自噬特异性

5、蛋白LC3呈点颗粒状聚集增多。同样，Westernblo结果显示，与对照组相比，不同时间点(2h、4h、8h、12h、24h)自噬相关蛋白LC3，p62及Beclinl的表达增加，且此作用呈时间依赖性(P

6、2mRNA表达与蛋白水平趋势相一致。利用siRNA的方法敲减p62蛋白，炎症因子释放减少中文摘要自噬在巨噬细胞介导的炎症中的作用及其机制研究(P<0．05)，提示p62在LPS诱导的Raw264．7巨噬细胞介导的炎症反应中起着重要的作用。结论：白噬参与了LPS激活的巨噬细胞炎症反应。白噬应激状态下，白噬诱导剂促进自噬相关蛋白的聚集，p62蛋白转录水平上升，同时上调炎症因子的生成和释放；相反，自噬抑制剂抑制自噬相关蛋A，p62转录及炎症因子的产生；siRNA敲减p62，炎症因子释放减少。这些结果说明，在自噬应激反应中，p62蛋白在LPS诱导的

7、Raw264．7巨噬细胞介导的炎症反应中起着重要的作用。关键词：自噬；炎症；p62；巨噬细胞作者：曹丽丹指导教师：刘春风胡丽芳自噬在巨噬细胞介导的炎症中的作用及其机制研究英文摘要AutophagyparticipatesinLPS·-stimulatedinflammationinmacrophageanditsmechanismsObjective：AbstrcatToinvestigatewhetherautophagywasinvolvedinlipopolysaccharide(LPS)-stimulatedinflammation

8、inmacrophageandtheunderlyingmechanisms．Methods：PartI：LPSwasusedtostimulateandinducethepro