nmda受体亚单位1在缺血大鼠脑svz神经干细胞上超微分布的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文NMDA受体亚单位1在缺血大鼠脑SVZ神经干细胞上超微分布的研究姓名：李志宁申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：董瑞国；徐铁军2012-03徐州医学院硕士学位论文NMDA受体亚单位1在缺血大鼠脑SVZ神经干细胞上超微分布的研究中文摘要目的研究NMDA受体亚单位1(N-methyl—D—aspartatereceptorsubunit1，NRl)在缺血大鼠脑室下区(subventricularzone，SVZ)神经干细胞上的超微分布及表达变化，为NMDA受体亚单位1参与缺血再灌注损伤引起的神经干细胞的增殖提供形态学方面的依据。方法健康成年S

2、D大鼠，体重220．250g，随机分为正常组、假手术组及脑缺血再灌注组，线栓法制作大脑中动脉栓塞(Middlecerebralarteryocclusion，MCAO)2小时再灌注模型，术后分1、3、7、14天4个时间点取脑，之后对正常组、假手术组及MCAO组大鼠分别进行灌注固定，做150larn振动切片，取含SVZ脑片，经梯度蔗糖浸泡，液氮冻融处理后，室温下兔血清封闭；分别通过Nestin免疫组织化学法标记神经干细胞和免疫金一银标记显示NRl，光镜下拍照。之后取Nestin标记阳性细胞脑片行免疫金一银标记显示NRl，光镜下拍照。分别取Nestin、NRI及Nest

3、in／NRl双标记的脑片的阳性部位，大小约1mm3，经系列脱水，置换，国产618树脂浸润，包埋，聚合，修块，做70nlrl超薄切片，经醋酸铀、枸橼酸铅双重染色，透射电镜观察、拍照。用ImagePro图像处理与分析系统进行光镜下图像分析。电镜组每组选取5张图片，每张图片选择相同的面积进行NRl计数。结果采用SPSSl6．0统计软件分析，数据以x±S表示，组间比较采用单因素方差分析，多个实验组之间比较采用最小显著差法(LSD)。以P<0．05为差异有统计学意义。结果1．光镜下可见，各组大鼠SVZ均可见NRl阳性细胞，假手术组阳性细胞IOD值与正常组比较差异没有统计学意义

4、(P>0．05)。MCAO一组大鼠NRl的2徐州医学院硕士学位论文IOD值在缺血后1d开始增加，7d达到高峰，14d恢复至3d水平；同样我们可以发现Nestin免疫组化染色结果中各组大鼠SVZ均可见Nestin阳性细胞，假手术组阳性细胞IOD值与正常组比较差异没有统计学意义(P>O．05)。MCAO．组大鼠Nestin的IOD值在缺血后3d开始增加，7d达到高峰，14d恢复至3d水平；Nestin／NRl免疫组化染色结果可见各组大鼠SVZ均有Nestin／NRl阳性细胞，假手术组阳性细胞IOD值与正常组比较差异没有统计学意义(P>O．05)。MCAO．组大鼠Nest

5、in／NRl的IOD值在缺血后1d开始增加，7d达到高峰，14d恢复至3d水平；2．电镜下可见NRl在缺血大鼠脑SVZ超微分布：通过透射电镜观察，大鼠脑SVZNestin免疫反应阳性产物呈黑色絮状电子致密物，分布于Nestin免疫反应阳性细胞的胞浆内；NRl免疫反应阳性产物呈黑色颗粒状，分布于SVZ各型细胞的胞膜、胞浆以及高尔基体和粗面内质网；神经干细胞内可见NRl免疫金颗粒与Nestin免疫组化产物共存。阴性对照样本未见任何标记。与正常组及假手术组比较可见脑缺血后SVZ神经干细胞上胞浆内NRl的显著增多，且NRl表达在l天开始增加，7天达高峰(P

6、，神经干细胞增殖达高峰。结论1．缺血脑损伤能够刺激成年大鼠脑SVZ神经干细胞的增殖；2．脑缺血早期就可诱发SVZ神经干细胞的NRl表达增多，由于此增加模式和脑缺血诱导的神经干细胞增加的时程相一致，提示NMDA受体亚单位1参与SVZ神经干细胞增殖过程。关键词SD大鼠；脑缺血；SVZ；神经干细胞；超微结构；NMDA受体徐州医学院硕士学位论文SubcellulardistributionofN—-methyl·-D·-asparticacidreceptorsubunit1inneuralstemcellswithinsubventriCularzoneofFocalCe

7、rebralIschemiaintheratAbstractobjecfiveResearchtheultrastructuraldistri【butionandexpressiensituationinischemiaSVZneuralstemcellsoftherats．Toprovidethetheorybasisfortheproliferationanddifferentiationofneuralstemcellsofischemia．MethodsMaleSDratswererandomlyassignedinto3groups：normalgro