下调notch1基因调控乳腺癌干细胞耐药机制的研究

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1、下调Notchl基因调控乳腺癌干细胞耐药机制的研究计：学位论文：88页表格：个插图：幅毛俊指导教师：李连宏教授申请学位级别：博士学位专业名称：病理学与病理生理学论文提交日期：2011年4月学位授予单位：大连医科大学论文答辩日期：2011年5月学位授予日期：2011年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教

2、育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：毒傻二签字目期：沈!兰年上月丛日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯．．1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9(一)第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9(二)第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(三)

3、第三部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45(四)第四部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59三、文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯73(一)综述正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯73(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯87五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯88下调Notchl基因调控乳腺癌干细胞耐药机制的研究博士研究生：毛俊指导教师：李连宏教授专业名称：病理学与病理生理

4、学摘要肿瘤组织及许多肿瘤细胞系中的肿瘤细胞在存在着异质性，即同一种细胞在性质、分化及功能上有很大的差异，其中一小部分细胞具有干细胞的自我更新和分化的能力，一定程度上扮演了干细胞的角色，这些细胞是肿瘤起始的源泉，在维持肿瘤生长、血管生成及促进肿瘤转移中起决定性作用，被命名为肿瘤干细胞fcancerstemcells，csc)。到目前为止，已在乳腺癌、胶质瘤、前列腺癌、胰腺癌、卵巢癌和头颈部肿瘤中均发现了肿瘤干细胞的存在。Notch信号通路作用非常广泛，其在调控干细胞增殖、诱导分化等方面发挥着非常重要作

5、用。例如，哺乳动物中枢神经系统的发育是通过Notch-Hes信号转导系统介导的，Notch信号主要维持神经干细胞的自我更新能力。此外，Notch—Hes信号还可以直接或问接作用于乳腺干细胞，促进乳腺干细胞向各种特殊类型肌上皮细胞分化和增殖。然而现在也有许多研究表明Notch信号通路的作用也是两面的，在促进细胞增殖的过程中，也可造成Notch信号的突变而发生异常的表达，并与一些肿瘤的发生密切相关。Notch信号不仅能够直接诱导肿瘤的生成，促进细胞抗凋亡和耐药，而且Notch可以通过与Wnt、Sox及N

6、F．KB等信号通路的相互作用以间接的方式诱导肿瘤形成。目前发现食管癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌中的Notch信号通路均有异常的表达，在肿瘤组织中最常被检测到的Notch受体家族成员是Notchl。目前化疗药物繁多，而紫杉醇是近几十年来用于临床效果最好的天然抗癌药物之一，目前普遍用于治疗卵巢癌、肺癌、乳腺癌等多种实体肿瘤。其主要药理机制是包括促进微管聚合，抑制微管解聚，同时可以诱导癌细胞凋亡。然而，由于化疗药物的长期使用，造成了许多癌细胞都具有了耐药性。耐药性的产生其主要与ABC转运子(ATP

7、．bindingcassettetransporters)家族的成员MDRl以及BCRP的过表达关系密切。高表达ABC转运子的细胞能够将药物泵出细胞膜外’，抑制药物的吸收，降低了药效，该特性对于肿瘤细胞逃逸化疗具有重要作用。干细胞一方面可以通过自身高表达MDR．1或BCRP来逃逸化疗药物的杀伤作用，增起自身的抗凋亡性，另一方面能在化疗药物刺激后进一步增高MDR一1和BCRP的表达适应新的微环境，从而导致在化疗后产生更强的耐药性，乳腺癌中存在着乳腺癌干细胞，使乳腺癌易于复发并且趋于难治。本实验首先从耐

8、药的乳腺癌细胞和乳腺癌MCF．7细胞系中分选出以CD44+／CD24．为标志的乳腺癌于细胞，检测Notchl信号通路分子在CD44+／CD24一细胞和非CD44+／CD24．细胞中的表达情况，探讨Notchl信号通路在乳腺癌干细胞耐药中的作用。其次，用表达NotchlshRNA的真核表达载体pGPU6／GFP／Neo稳定转染MCF．7细胞，诱导Notchl基因沉默，在体内和体外研究Notchl基因下调后紫杉醇对MCF一7细胞及乳腺癌干细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响，探