共表达h5亚型aiv ha基因和鸡il-2基因或鸡il-6基因的重组鸡痘病毒对鸭的免疫效力

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1、共表达H5亚型AIVHA基因和鸡IL一2基因或鸡IL一6基因的重组鸡痘病毒对鸭的免疫效力ImmuneEfficacyofRjecombinantFowlpoxVirusesCo-expressingtheHAGeneofH5N1AvianInfluenzaVirusandChickenInterleukin2GeneorChickenInterleukin6GeneinDucks[本文受公益性行业科研专项(201003012)、国家863计划(201l从10A209)和江苏省高技术研究计划(BG2007336)资助]研究生：钱程

2、专业：预防兽医学导师：彭大新教授陈素娟副教授刘秀梵教授扬州大学兽医学院2012年6月钱程：共表达H5弧型AIVHA基因和鸡细胞冈子的重组鸡痘病毒对鸭的免疫效力!共表达H5亚型AIVHA基因和鸡IL一2基因或鸡IL一6基因的重组鸡痘病毒对鸭的免疫效力研究生：钱程导师：彭大新教授陈素娟副教授刘秀梵教授摘要家鸭在禽流感病毒的传播中发挥着重要作用。为提高疫苗的免疫保护效力，有效控制家鸭的禽流感，研究者们正着力研制新型的基因工程疫苗。以鸡痘病毒(Fowlpox，FPV)为载体的基因工程疫苗已经发展得较为成熟。鸡痘病毒载体根据不同的宿主类型

3、可以表现出不同的复制特性，当其为非复制性载体时，具有安全性高、受母源抗体干扰小等优点，但也存在免疫剂量要求高、需要多次加强免疫等缺陷。细胞因子作为免疫佐剂可以发挥特定的免疫调节作用，可能是增强重组鸡痘病毒免疫效力的有效途径之一。前期工作显示，共表达鸡IL．2基因和H5亚型AIVHA基因(rFPV-AIH5AIL2)及共表达鸡IL一6基因和H5亚型AIVHA基因(rFPV-AIH5AIL6)这两株重组鸡痘病毒对鸡有良好的免疫保护效果。本研究评价其在家鸭中的免疫效力，为水禽流感疫苗的研制奠定基础。1．重组鸡痘病毒对麻鸭的免疫效力14

4、4只24日龄麻鸭随机分成8组，分别以105PFU(O．2mL／只)的剂量于颈部皮下免疫rFPV-SYHA、rFPV-LKHA、rFPV．AIH5AIL6、rFPV-AIH5AIL2、rFPVolL6和wt—FPV，同时设H5亚型禽流感灭活疫苗组(0．5mL／只)和PBS组(O．2mL／只)对照。免疫后0、7、14和21天称重、采血，分离血清检测HI抗体效价。免疫当天从PBS组随机挑选两只麻鸭，并于免疫后9、16和23天从各组随机挑选两只麻鸭无菌采集胸腺、脾脏、法氏囊和外周血，进行淋巴细胞活化实验和E．玫瑰花环实验。免疫后23天，

5、所有麻鸭以10575EID50／只的剂量用H5亚型禽流感强毒株(A／mallard／Huadong／S12005)滴鼻点眼攻毒。攻毒后3、5和7天各试验组分别采集喉头和泄殖腔棉拭，接种10日龄非免疫鸡胚分离病毒。扬州人学硕十学位论文结果发现，rFPV-AIH5AIL6和rFPV-AIH5AIL2免疫后麻鸭的抗体水平高于rFPV-SYHA和rFPV-LKHA免疫组，但显著低于灭活苗免疫组。rFPV-AIH5AIL6和rFPV-AIH5AIL2免疫组的淋巴细胞活化水平以及活性和总E玫瑰花环率都显著高于其它重组病毒免疫组。rFPV-A

6、IH5AIL6和rFPV-AIH5AIL2免疫组的保护率分别为80％并H66．7％，高于rFPV-SYHA和rFPV-LKHA免疫组(41．7％和33．3％)。rFPV-AIH5AIL6和rFPV-AIH5AIL2免疫组的排毒率在所有重组病毒免疫组中是最低的，并且排毒时问最短。重组病毒免疫后各免疫组麻鸭的增重无显著性差异。2．重组鸡痘病毒对樱桃谷肉鸭的免疫效力144只10日龄樱桃谷肉鸭随机分成8组，称重，分别以105PFU(0．2mL／只)的剂量颈部皮下免疫rFPV-SYHA、rFPV-AIH5AIL6、rFPV-AIH5AIL

7、2、rFPV-IL6、rFPV-IL2及wt．FPV，同时设灭活苗组(0．5mL／只)和PBS组(0．2mL!只)对照。于免疫后0、7、14和21天采血，分离血清检测HI抗体效价。免疫当天从PBS免疫组随机选取两只鸭子，并于免疫后7、14和21天从各组随机选取两只鸭子无菌采集胸腺、脾脏、法氏囊和外周血，进行淋巴细胞活化实验以及E玫瑰花环实验。免疫后19天，每组随机取一只樱桃谷肉鸭，无菌采集脾脏，以荧光定量PCR进行MHCI、MHCII和RIG．1分子的表达检测。免疫后21天，称重，所有肉鸭使用以105。75EID50／只的剂量用

8、H5亚型禽流感强毒株(A／mallard／Huadong／S／2005)滴鼻点眼攻毒。攻毒后3、5和7天各试验组分别采集喉头和泄殖腔棉拭，接种l0同龄非免疫鸡胚分离病毒。结果发现，rFPV-AIH5AIL6和rFPV-AIH5AIL2免疫后肉鸭的抗体水平高于rF