斑马鱼(danio rerio)胚胎模型评价内分泌干扰物的类雌激素效应

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1、华中农业大学硕士学位论文斑马鱼（Daniorerio）胚胎模型评价内分泌干扰物的类雌激素效应姓名：陈敏杰申请学位级别：硕士专业：土壤学指导教师：张捷；梁勇201206斑马鱼(Daniorerio)胚胎模型评价内分泌干扰物的类雌激素效应摘要内分泌干扰物(EndocrineDisruptingChemicals，EDCs)对人类和野生动物的有害效应己引起人们的广泛关注。我们通过研究天然雌激素17D一雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、人工合成激素己烯雌酚(DES)、4一辛基苯酚(OP)、双酚A(BPA)、他莫昔芬(TMX)和三．(2，3一二溴丙基)异氰脲酸

2、酯(TBC)等几种典型的内分泌干扰物对斑马鱼胚胎中VTG基因表达的影响，探讨斑马鱼胚胎能否用于分析及评估化合物的内分泌干扰效应。结果显示对照组相比，E2能显著诱导斑马鱼胚胎中VTG基因的表达，并具有明显的剂量．效应关系。比较不同发育时间段的E2暴露实验结果，我们发现0．51xME2在斑马鱼胚胎发育早期并不能诱导VTG的生成，斑马鱼胚胎发育144小时(6dpf)后，斑马鱼胚胎中可检测到VTG基因的极显著表达。原位杂交实验结果表明对照组中未观察到VTG基因的表达；但0．5．ME2暴露斑马鱼胚胎4～7d后在样本的肝脏和心脏处可见VTG基因的表达，且各组样

3、本中VTG阳性表达率分别为12．50％、39．13％、89．36％和100％。为了进一步评估斑马鱼胚胎VTG基因的表达情况作为环境风险评价的有效生物学标记的可行性，选用不同浓度的E2、E3、DES、OP、BPA、TMX和TBC等几种典型的内分泌干扰物开展暴露实验。结果显示，E2、E3、DES和OP能对斑马鱼胚胎VTG产生诱导作用，并具有剂量．效应关系，表现出不同程度的类雌激素效应。E2、E3、DES和OP诱导斑马鱼胚胎VTG表达的LOEC分别为：1．25x10‘2、1．46、1．65x10。4和1．35。BPA对斑马鱼胚胎VTG表达无影响。复合暴露

4、实验结果显示，TMX和TBC单一暴露对斑马鱼胚胎VTG基因的表达无显著影响；与E2的复合暴露实验结果显示，TMX和TBC均能明显抑制由0．51xME2引起的斑马鱼胚胎VTG基因表达量的上升。TBC复合暴露的原位杂交实验结果与荧光定量PCR结果相～致，即仅在0．5I．tME2暴露组的胚胎的心脏和肝脏处出现VTG的表达。将本模型实验数据与其他几种评价类雌激素效应的模型相比较，可以看出，以斑马鱼胚胎作为检测环境内分泌干扰物类雌激素效应的模型具有较强的特异性和一定的灵敏度。因此，通过检测斑马鱼胚胎中VTG基因的表达，同样可作为一种生物标志物，分析评估化合物

5、的内分泌干扰效应，斑马鱼胚胎可以作为一种模式动物开展多种内分泌干扰物的类雌激素效应研究。关键词：斑马鱼胚胎，卵黄蛋白原，内分泌干扰物，类雌激素，模型华中农业大学2012届硕士研究生学位论文ABSTRACTTheharmfuleffectsofendocrinedisruptingchemicals(EDCs)onhumansandwildlifehaveattractedwidespreadattention．WiththeexposuretestsofsometypicalEDCssuchasnaturalestrogen179一estradio

6、l(E2)，estriol(E3)，synthetichormonesincludingdiethylstilbestrol(DES)，4-octylphenol(OP)，bisphenolA(BPA)，tamxifen(TMX)and3．(2，3．dibromopropyl)isocyanurate(TBC)，andinvestigatingtheireffectsoninducingVTGspatialandtemporalexpressioninzebrafishembryos，zebrafishembryoswasinvestigatedt

7、obeusedasamodelinanalyzingandassessingendocrinedisruptioneffectsofcompounds．111eresultsrevealedthatE2CanobviouslyinduceVTGexpressionofzebrafishembryos．comparedwiththecontr01．Theinductionwasdose-depended．0．59ME2cannotinduceVTGexpressionduringearlylifestagesofzebrafishembryos，bu

8、ttheexpressionofVTGgenecallbedetectedsignificantlyinzebrafish