hcmv经hippo-yap信号通路对绒毛外细胞滋养细胞功能影响的体外研究

《hcmv经hippo-yap信号通路对绒毛外细胞滋养细胞功能影响的体外研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。7—)L—jL一刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Ⅱ结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。36结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．57j窦谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．66原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．67万方数据泰山医学院硕士学位论文HCMV经Hippo．YAP信号通路对绒毛外细胞滋养细胞功能影响的体外研究研究生：沈龙霞专业：妇产科学导师：于新艳教授中

3、文摘要研究背景人巨细胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)又称人类疱疹病毒5型，是疱疹病毒科p亚科的一种常见病毒，广泛存在于自然界中，人是其唯一宿主。HCMV是目前已知的引起孕妇活动性感染、胚胎及胎儿宫内感染的最常见病原体。孕期母体感染HCMV后，可通过胎盘垂直传播或者生殖道逆行传播给胎儿，引起胚胎或胎儿宫内感染。HCMV宫内感染可导致胚胎停育、流产、死胎、早产、胎儿宫内发育迟缓等异常妊娠结局，以及新生儿认知能力发育落后、智力低下、感音神经性耳聋等严重远期后果。目前HCMV发生宫内传播及引起胎儿发育异常的具体机制和途径尚不清楚，HCMV感染胎盘滋养层细胞被认为是启动宫内感

4、染的第一步。绒毛外细胞滋养细胞(extravillouscytotrophoblast，EVT)增殖、侵袭能力下降，导致螺旋动脉重铸不良，胎盘物质交换功能低下，是流产、死胎、胎儿宫内发育迟缓、脑发育落后等异常妊娠的重要病理生理机制。研究目的体外研究HCMV经Hippo—YAP信号通路对早孕EvT功能的影响。研究方法1．无菌收集早孕绒毛组织，应用改良的复合酶消化梯度离心法分离、培养原代EVT：2．通过免疫细胞化学染色检测CK7、Vim、c—erbB．2表达情况鉴定细胞来源；3．常规培养人胚肺成纤维细胞MRC一5细胞株，扩增HCMVADl69病毒株，并根据Reed—Muench法测定TCID50；

5、4．将HCMVADl69病毒液接种于EVT培养基中，通过免疫荧光细胞化学染色检测HCMVpp65抗原，以确定HCMV感染EVT情况；万方数据泰山医学院硕士学位论文5．MTT比色法检测HCMV对EVT体外增殖的影响，为后续试验筛选最佳病毒接种剂量；6．实验分为正常组(EVT)及病毒组(EVT+HCMV)；7．荧光定量PCR检测HCMV经Hippo—YAP信号通路对EVT表达Mstl、Mst2、SAV、Latsl、Lats2、Mobl、YAP、TAZ、TEADl~4刑[斟A水平的影响；8．免疫荧光化学染色法、Westernblot技术检测正常组及病毒组YAP蛋白水平，以了解HCMV对EVT的YAP

6、蛋白表达的影响。9．体外细胞侵袭实验检测HCMV对EVT侵袭功能的影响。研究结果1．倒置显微镜下见分离的原代细胞贴壁后呈三角形或不规则多边形，平铺片状生长：2．细胞来源鉴定结果显示，几乎所有分离培养的原代细胞均可见CK7和c—erbB一2表达，极少数可见Vim表达，提示实验中分离培养获得的原代细胞为高纯度EVT；3．病毒扩增后测定HCMVADl69病毒株TCID50为104·'／0．1ml；4．EvT培养基中接种HCMV后，免疫荧光化学染色结果显示病毒组细胞内可见大量红色HCMVpp65抗原阳性信号表达，正常组细胞内未见阳性信号表达；5．MTT检测显示，与正常组相比较，接种病毒48h时，30p

7、l、409l、509l、701al、1009lHCMV病毒液对EVT增殖有明显抑制作用(尸0．05)，故选择30}tl100TCID50HCMWl209l培养基进行后续实验：6．荧光定量PCR显示，两组EVT中均有Mstl、Mst2、SAV、Latsl、Lats2、Mobl、YAP、TAZ、TEADl、TEAD2、TEAD3、TEAD