microrna-214抑制小鼠心脏压力负荷增加所致的心室重构

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名：船师签历二级学院2河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写

2、的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：屏翮灸新签勘列伊年乡月多霸目录IIIIIIlllllIIIIIIIIllIIIIIIIU』Y2582737中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3研究论文MicroRNA．214抑制小鼠心脏压力负荷增加所致的心室重构⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6月Ⅱ舌

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34综述微小RNA与心脏疾病⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40致谢i⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50中文摘要_icroRNA-214抑制小鼠心脏压力负荷增加所致的心室重构摘要目的：心血管严重威胁人类健康。在高血压等长期心脏后负荷增加的患者中，早期心功能代偿性增加，进而发生心肌肥厚、心肌纤维化，这种心室重构使心功能进一步恶化、失代偿，最终发展为心力衰竭。以往的研究表明，多种m埘NAs在心肌肥厚、心室重构中表达异常，提示这些异常表达的miR_NAs在心肌损伤的发生及发展过程中可能发挥着重要作用。有研究发现miR-214在大鼠急性心

5、肌梗死和心肌肥厚模型中出现了异常表达；还有研究证实在H202诱导的乳鼠心肌细胞损伤中，miR-214对心肌损伤有保护作用。本研究通过腹主动脉结扎法，造成小鼠左心室压力负荷增加，建立小鼠心肌肥厚模型，通过应用微小RNA214的前体和抑制剂分别上调和下调其表达，进而观察miR-214在小鼠心脏后负荷增加所致的心肌肥厚、心肌纤维化和心室重构中的作用。方法：本研究采用腹主动脉结扎法建立小鼠心肌肥厚模型。通过尾静脉注射微小RNA-214的前体上调其表达水平。采用清洁级雄性昆明小鼠，体重259左右，将72只小鼠随机分为3组。Sham组(n=24)；Ad-

6、GFP组(n=24)，尾静脉内注射等量的生理盐水，4天后结扎腹主动脉；Ad．miR-214组(n-24)，尾静脉内注射miR-214前体(即转染)，4天后再行腹主动脉结扎。在转染后4天和八周两个时间点，分别采用实时定量PCR法检测各组miR-214表达的变化。腹主动脉结扎术后八周，记录各组小鼠体重，取小鼠心脏，记录心重体重比(啪W)，留取心脏病理切片，比较各组小鼠心室内径，马松染色观察心肌组织胶原含量；造模八周后流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡；westernblot方法及实时PCR方法在蛋白及基因水平检测心肌组织中心房利钠肽(ANP)、肌球蛋

7、白重链(p-MHC)、胶原I(collagentypeI)、胶原HI(collagentypeIIi)的表达水平。在另一个独立的实验中，将体重259的雄性昆明小鼠随机分为对照组和Ad—anti．miR组，Ad-anti—miR组尾静脉内注射miR-214抑制剂，敲除小鼠心肌内微小RNA．214，对照组尾静脉内注射等量的Ad-GFP，造模8周后，检测上述指标，观察在正常小鼠中敲除miR-214对心脏的影响。中文摘要结果：①与假手术组相比，TAC术后8周，miR-214表达水平明显上升俾<0．01)。②在转染miR-214前体和抑制剂后的4天和8

8、周分别检测心肌组织中mi_R-214的表达水平，与对照组相比，miR-214在前体组明显上升(P<0．01)，在抑制剂组则显著下降(P<0．01)。⑧与Ad-GFP