nitidine对小胶质细胞活化的调控作用及其机制研究

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1、第二军医大学硕士学位论文Nitidine对小胶质细胞活化的调控作用及其机制研究姓名：朱枫申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：何成201205Nitidine对小胶质细胞活化的调控作用及其机制研究摘要中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)损伤后普遍伴随着神经炎症反应。小胶质细胞被认为是CNS内一类重要的神经免疫细胞，在CNS损伤引起的炎症反应中发挥了重要作用。正常情况下，CNS中的小胶质细胞处于相对静息的状态一一胞体较小，突起细且长满分枝。当CNS损伤后，小胶质细胞会被激活。活化的小胶质细胞突起回缩，胞体变肥大，呈现出

2、阿米巴样的形态，并能分泌许多炎症介质一一包括细胞因子、趋化因子、氮氧自由基等。适度活化的小胶质细胞能够有效清除病源体和死亡细胞的碎片，但过度活化的小胶质细胞则能引起神经元的继发性损伤，参与各种神经病理过程。研究表明，抑制小胶质细胞活化能够从一定程度上抑制神经炎症反应，并减轻CNS损伤后的病理症状。因此，如果能够找到有效调控小胶质细胞活化的药物，将有利于CNS损伤后的修复。Nitidine(NTD)是从芸香科花椒属植物两面针中提取的·类苯并菲啶类生物碱，是该植物内的主要有效成分之一。虽然NTD作为一种消炎止痛的纯天然中药己有数千年的使用历史，但是其在中

3、枢神经系统中的研究尚未见报道。本研究利用LPS诱导体外培养的小胶质细胞活化模型，通过形态学、real．timePCR、免疫蛋白印迹等手段分析了NTD对小胶质细胞活化的调控作用及其作用机制；并利用免疫组织化学的方法观察了NTD在小鼠大脑针刺伤模型中的作用。本研究的主要结果如下：l、大鼠原代小胶质细胞的纯化培养。Ibal染色结果显示，体外纯化培养的小胶质细胞纯度能够达到95％以上。2、NTD能够抑制小胶质细胞的活化。LPS刺激小胶质细胞时可诱导其细胞活化，表现为形态的改变、促炎细胞因子的释放、迁移能力的增强等。NTD能够抑制LPS引起的小胶质细胞活化。3

4、、NTD在实验浓度下不具有明显的细胞毒性。MTT和LDH实验结果显示，在小于19M浓度时，NTD对N9和原代小胶质细胞都没有表现出毒性作用。4、ERK信号通路可能参与NTD调节小胶质细胞活化过程。对MAPKs信号通路的分析表明，NTD能够抑制LPS诱导小胶质细胞活化时ERK的磷酸化，但不影响p38和JNK的磷酸化水平。5、NTD能够抑Nd,鼠大脑针刺损伤引起的小胶质细胞活化，并减少神经元的凋亡。小鼠大脑针刺伤造模后，按照2．5mg／kg／day进行腹腔注射NTD，连续给药3天，结果发现，与生理盐水组相比，给药组损伤区域周围活化小胶质细胞的数量显著减少

5、，并且神经元凋亡比例也显著下降。第二军医大学硕士学位论丈．2．关键词：Nitidine，小胶质细胞，活化，中枢神经损伤Nitidine对小胶质细胞活化的调控作用及其机制研究AbstractNeuroinflammationisacommonresultaftercentralnervoussystem(CNS)injury．AstheresidentimmunecellofCNS，microgliaplaysapivotalroleinneuroinflammation．Inthenormalbrain，microgliaispresentinthe

6、restingstate，whichischaracterizedbyasmallsomaandnumerousverythinandhighlybranchedprocesses．InresponsetoCNSinjury,microgliaisactivated，contractsitsprocesses，transformsfromaramifiedtoanameboidmorphologyandsecretsvastnumbersofinflammatorymediators，suchascytokines，chemokinesandfree

7、radicals．Uponactivation，microgliacanphagocytoseandclearthepathogensandcelldebris．Butoverorchronicmicrogliaactivationcancauseneuronaldeath，andisinvolvedinnumerousneurodegenerationconditions．Inhibitionofmicrogliaactivationhasbeenshowntoreducetheneuroinflammationandpathologicalpro

8、cessesatierinjury．Nitidine(NTDliSabenzophenanthridinea