retronectin诱导的dc-cik细胞生物学特性及对k562细胞杀伤活性的研究

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1、万方数据中图分类号BZ三Q：三!UDC610硕士学位论文学校代码lQ三三三密级公珏RetroNectin诱导的DC．CIK细胞生物学特性及对K562细胞杀伤活性的研究BiologicalCharacteristicsandAntitumorActivityofDC—CIKCellsInducedbyRetroNectinforK562cells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：全玲丽临床医学内科学湘雅三医院唐雪元教授论文答辩日期醴!至：衫答辩委员会主席中南大学2014年5月万方数据学位论文原创性声明fI

2、Mlmlillllllllill+llfY2688531本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：趁豳日期：立盟L年量月丝日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论

3、文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：日期：盟年』月趁日导师签名—膨日期：艘生年尘月三面万方数据RetroNectin诱导的DC—CIK细胞生物学特性及对K562细胞杀伤活性的研究摘要目的：探讨重组人纤维连接蛋白(RetroNectin，RN)诱导的DC．CIK细胞生物学特性以及对K562细胞杀伤活性的影响，以

4、建立一种高效、简便、杀瘤活性强的DC．CIK细胞培养方法。方法：通过分离健康人外周血单个核细胞，经DC．CIK条件培养基诱导培养获得大量的DC．CIK细胞，将其分为空白组、对照组和实验组，空白组不加入RN和DC—CIK条件培养基(PBMCs组)，对照组不加入RN(DC．CIK组)，实验组加入RN(RN．DC—CIK组)，在倒置显微镜下观察细胞动态增殖情况及细胞形态变化，采用流式细胞仪检测其免疫表型，AnnexinV-FITC检测细胞的凋亡情况。应用CCK一8试剂盒分别检测两组细胞在不同效靶比时对K562细胞的杀伤活性，采用酶

5、联免疫法(ELISA)检测K562／DC．CIK组、K562／RN．DC．CIK组细胞IFN小IL—l8分泌水平。采用实时定量多聚酶链式反应(ImPCR)检测细胞中miRNA．21表达情况。结果：1．RN—DC．CIK组细胞生长增殖速度显著快于DC．CIK组2倍～3．5倍，从第7天到第14天，两组比较差异有统计学意义(P<0．05)。两组中的DC．CIK细胞成熟标志物D3+CD56+、CD86的表达随着培养时间的延长而增加，但两组问比较差异无统计学意义(尸>0．05)。DC．CIK组细胞凋亡率为5．44土1．11％，RN．D

6、C．CIK组细胞凋亡率为1．81土0．46％，两组比较差异有统计学意义(P

7、T-PCR检测分析可知，与对照组相比，K562／RN—DC．CIK组细胞miRNA．2l表达显著低于K562／DC—CIK组，两组比较差异有统计学意义(尸<0．05)。结论：1．用RetroNectin诱导可提高DC—CIK细胞的增殖速度及抗肿瘤的能力。2．用RetroNectin诱导可阻断miRNA．21的表达，可能为II万方数据RetroNectin诱导DC．CIK细胞抗肿瘤活性增强的机制之一。图11幅，表3个，参考文献47篇。关键词：重组人纤维连接蛋白；细胞因子诱导的杀伤细胞；树突状细胞；过继免疫疗法分类号：R730．

8、51III万方数据BiologicalCharacteristicsandAntitumorActivityofDC-CIKCellsInducedbyRetroNectinforK562cellsAbstractObjective：Toinvestigatethebiologicalfu