mirna214促进胃癌sgc7901ddp细胞对顺铂耐药及相关机制的研究

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特另tlDn以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。储虢啦日期：垃年且堕日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技

2、术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：熊导师签名三唑口期：圣型L年』月堕日硕士学位论文中文摘要miRNA．214促进胃癌SGC7901／DDP细胞对顺铂耐药及相关机制的研究摘要背景：胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，化疗是改善进展期胃癌及胃癌术后患者生存时间及生活质量的基本治疗手段，但化疗耐药限制了化疗药物的有效使用，90％的转移性肿瘤患者治疗失败是由化疗耐药引起。有关化疗耐药的相关机制尚未完全阐明，可能与以下因素有关：ABC型膜载体蛋白表达量的升高；p53基因的突变；细胞凋亡通路受阻和DNA损伤修复系统的失调等。顺铂是

3、一种高效广谱的周期非特异性抗癌药物，其全称为顺式二氯二氨合铂II(cis．dichlorodiamminoplatinumII)，目前仍是胃肠道肿瘤化疗一线药物，抗肿瘤作用强，但胃癌对顺铂化疗耐药制约了顺铂的有效使用。微小RNA(microRNA．miRNA)为一类K度是21．25nt的单链非编码蛋白RNA，研究发现，其与肿瘤耐药关系密切，并影响肿瘤的化疗效果。miRNA一214位于人的1号染色体的长臂(1q24．3)Dnm3基因内，本课题组前期研究表明miRNA．214与细胞的生长和增殖有关，并能促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。至今为II：，有关miRNA一214与顺铂耐药方面的研究仅

4、限于卵巢癌。本实验首次研究miRNA一214促进胃癌SGC7901／DDP细胞对顺铂的耐药及相关机制。目的：探讨miRNA一214在促进胃癌细胞SGC7901／DDP对顺铂耐药中的作用及其机制，寻找新的分子治疗靶标，指导临床用药。方法：II硕士学位论文中文摘要1、通过荧光定量PCR检测亲本细胞系SGC7901和耐药细胞系SGC7901／DDP中miRNA．214的表达差异；2、通过转染miR一214inhibitors下调耐药细胞系SGC7901／DDP中miR一214的表达量，以无关序列转染组(NC组)作为阴性对照，同时以空白转染组(CON组)作为空白对照，转染24h后通过荧光显微镜

5、观察瞬时转染效率；3、检测耐药细胞系SGC7901／DDP细胞瞬时转染miRNA．214抑制剂(miRNA一214inhibitors)后miRNA．214表达量的改变；4、MTT检测转染miRNA一214抑制剂(miIⅢA一214inhibitors)后SGC7901／DDP细胞对DDP药物敏感度的变化；5、Westernblot检测miR．214inhibitors转染组、无关序列转染组(NC组)、空白转染组(CON组)分别转染miRNA一214抑制剂及无关序列后对靶基因PTEN蛋白表达量的影响。结果：1、荧光定量PCR检测miRNA一214的含量：与亲本细胞株SGC7901相比，

6、miRNA．214在耐药细胞株SGC7901／DDP中呈显著高表达(P<0．01)，是亲本细胞株SGC7901中表达量的2．320=k0．106倍，即与亲本细胞株SGC7901相比，miRNA．214在对JII贼I(DDP)耐药的人胃癌细胞株SGC7901／DDP中呈显著高表达；2、瞬时转染24h后，于荧光显微镜下观察计数检测转染效率，miR一214inhibitors转染人胃癌SGC7901／DDP细胞，转染效率约80％；3、转染后SGC7901／DDP细胞中的miRNA一214含量变化：以空白转染组(control组)表达量为基准，miRNA．214inhibitors转染组miR

7、NA一214水平是control组的0．187+0．03l倍，无关序列转染组miRNA．214水平是control组的0．869士0，025倍(P<0．05)，H口将III硕士学位论文中文摘要miRNA．214的抑制片段转染到SGC7901／DDP中后miRNA一214表达量显著降低；4、MTT试验结果显示，miRNA．214inhibitors转染组DDP对细胞生长的抑制率明显高于阴性对照片段转染组的抑制率。miRNA一214inhibito