高效液相色谱法（hplc）

《高效液相色谱法（hplc）》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、高效液相色谱法(HPLC)一．概述色谱法是一种应用范围相当广泛的分离分析技术，它已有近百年的发展史。二十世纪五、六十年代石油及石油化工的突起促使了GC技术大发展，而七、八十年代生命科学、生化、制药工业的发展推动了HPLC的迅速发展。目前除分析化学外，生物化学，石油化学，有机化学，无机化学等学科都普遍采用色谱技术。现代高效液相色谱仪，以其高效，快速和自动化等特点成为当代分析仪器中发展最快的仪器。HPLC已成为操作方便、准确、快速并能解决困难分离问题的强有力的分析手段。1．HPLC的特点（1）适用范围广已知有机

2、物中仅20%不经预先化学处理，可用GC分析；而其余80%有机物可用HPLC分析。HPLC适于分离生物、医学大分子和离子化合物，不稳定的天然产物，种类繁多的其它高分子及不稳定化合物。（2）流动相及固定均与样品分子作用，而GC仅固定相与样品分子作用。（3）具有独特性能的柱填料（固定相）种类较多，具有多种分离方式，适于各种化合物分析。（4）分离温度较低，提高了分离效率。（5）具有一些独特的检测器：电化学，示差折光，可见紫外吸收及荧光检测器等。（6）样品易回收。2．HPLC分类按分离机理分为四类：PDFcreate

3、dwithFinePrintpdfFactorytrialversionhttp://www.pdffactory.com吸附色谱（液固）：通过试样组分对活性固体表面吸附亲合力的不同实现分离。对具有不同官能团的化合物和异构体有较高选择性，早期应用较多，现在大多可用正相键合相色谱替代，常用硅胶柱。分配色谱：不同溶质分子按其在固定相和流动相中分配系数不同得到分离。现代分配色谱即化学键合相色谱，是将各种不同的有机基团通过化学反应键合到硅胶表面，具有很好的化学稳定性和热稳定性。大部分分离问题都可用键合相色谱解决。离

4、子交换色谱：以离子交换剂为固定相，试样中电离组分与交换剂基体相反电荷的离解部位亲合力不同而分离。用于分离无机或有机离子。固定相为阴（阳）离子交换树脂，流动相为电解质溶液。分子排阻色谱：按物质分子量大小进行分离。不仅对高聚物，对分子量差别较大的低聚物或小分子化合物也可进行分离。它又分为用于非水体系的凝胶渗透色谱（GPC），用于高聚物分子量及其分布的测定。又有适于分离和表征水溶性高聚物的凝胶过滤色谱。分子排阻色谱主要用于生物化学和高分子化学，在有机化学中应用也日益增多，已成为HPLC的一个重要分支。上述四种是H

5、PLC的重要分支，各有不同分离机理和应用领域，各有独到之处。3．气相色谱的基本理论对HPLC的发展起了指导和推动作用，并自然延伸到液相色谱。二．液相色谱仪HPLC流程现代HPLC按用途分为分析型、制备型、专用型（GPC），其基本部件相同。HPLC仪由输液系统，进样系统，柱系统、检测和记录系统组成。高压泵，色谱柱和检测器为三大关键部件。4．溶剂贮存器和溶剂脱气PDFcreatedwithFinePrintpdfFactorytrialversionhttp://www.pdffactory.com（1）简单的

6、贮液器为500ml试剂瓶，盖严，防溶剂挥发，瓶内泵吸液管端装10ul不锈钢烧结滤头过滤溶剂。溶剂应预先过滤。（2）流动相脱气流动相进泵前必须脱气，尤其是水和极性溶剂。否则过柱以后，压力降低放出溶解的空气。气泡将影响分离效率、基线不稳使检测器灵敏度降低，甚至不能正常工作。脱气法：微型真空泵在线脱气，适于单一溶剂（如GPC）。吹He脱气，如He脱气机在线脱气。超声波脱气等。5．输液系统一高压泵色谱柱用细粒填料，填充紧密，液体流动相粘度高，阻力大，必须高压输液。泵为关键部件，直接影响整个仪器和分析结果的可靠性。2

7、2.要求：A输出压力高：一般为150~300kg/cm压力，最高达500kg/cmB流量范围宽：0.1~10ml/min连续可调C流量稳定:流量恒定无脉冲,流量精度及重现性为+/-0.5%左右。D耐腐蚀：耐各种有机溶剂、水和缓冲溶液。E密封性好：泵室小便于清洗维修。泵分为两类：恒流泵：柱阻力变化，流动相粘度变化，引起柱压变化而流量恒定，如往复柱塞泵。恒压泵：流量可随外界阻力变化而输出压力恒定，如装柱用的气动泵。HPLC广泛采用往复柱塞泵，由液缸，柱塞，单向阀和驱动机构组成。密封圈耐磨（PTF-石墨）单向阀，

8、柱塞为人造红宝石。泵流量不稳使保留变化，直接影响峰面积重现性和定量精度，使噪音变大，最小检测量变大。双柱塞泵流量平稳，输液精度高，流量精量+/-0.1%，流量准确度+/-1%。双柱塞泵液缸容积很小（几微升~几百微升）适于梯度洗脱。为提供无脉动的准确流量，在输液系统中还需加一些辅助设备：过滤器、混合器、阻尼器，测压装置。多元混合溶剂需用比例阀，如二元、三元和四元比例阀。溶剂按预定比例，低压混合后，经高压泵输入系统。