asiaⅰ型fmdv+vp1蛋白原核表达及条件优化

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1、新疆农业大学硕士学位论文AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白原核表达及条件优化姓名：魏婕申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：符子华;冉多良20090601AsiaI型FMDVVPl蛋白原核表达及条件优化摘要口蹄疫(Footandmouthdisease，FMD)是由口蹄疫病毒(Footandmouthdiseasevirus，FMDV)引起的偶蹄动物发生的高度接触性的传染病。由于其爆发会对畜产品进出口带来严重影响，造成全球经济的巨大损失，因此被世界动物卫生组织(Worldorganizationforanimalhealth，OI功列

2、为A类家畜传染病之首。vPl蛋白是口蹄疫病毒的结构蛋白，是主要的中和抗原位点，可以诱导动物机体产生中和抗体，对机体产生保护性反应。本实验将AsiaI型FMDVVPl基因通过与pGEM．T载体连接，得到连接质粒pGEM．KZ．VPl，经过菌落扩增、酶切回收纯化VPl基因片段，将其与原核表达载体pET-28a连接，成功构建重组表达载体pET28．KZ／03VPl。将重组载体转化至大肠杆菌BL21中，用不同的IPTG浓度及不同诱导时间诱导菌株表达VPl蛋白，分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响，以确定最佳表达条件。结果表明，在

3、一定范围内，随IPTG浓度的增高，表达量并不会随之增大；而在固定诱导时间内，随诱导时间的延长，表达量会随之增大。最后确定当IPTG浓度为3mmol／L，诱导表达到最长时间9h时，VPl蛋白表达量最大。本实验的结果可以为以后大量表达重组蛋白VPl，及生产诊断试剂和疫苗产品提供实验依据，同时也为节省IPTG的使用量，降低生产成本，提高生产效率提供参考依据。关键词：AsiaI型口蹄疫病毒；VPl蛋白；表达；IPTG；诱导浓度与时间OptimizationandprokaryoticexpressionoftheVP1proteinofFMDV

4、typeAsiaAbstractFMDVisthecausativeagentofFMD，ahighlycontagiousdiseaseofcloven-hoofedanimals，inadditioncountriesandthepeople’Slivingbyseverelyaffected．FMDinmanycountriesseverelylimitsitstradeinanimalsandanimalsproductsduetointernationalregulationsdesignedtolimitspreadofth

5、edisease．AnditwaspaidmofeattentionbyOIE．TheVPlgeneisthemainantigenicepitopesofFMDVwhichplaysveryimportantrolesininducingneutralizationantibodiesandmakeprotectivefunction．Inthisstudy,gottheVPlproductfromrecombinantplasmidofpGEM—KZ-VPl，thenligatedtheVPlgeneofFMDVofAsiaIand

6、thepET-28aexpressionvector,thentransformedintoBL21cellsandinducedtherecombinantplasmidwithdifferentconcentrationofIPTGanddifferenttimetoexpresstheVPlprotein．TheresultsofSDS—PAGEandWesternblotdemonstratedthattheexpressedVPlproteinwasexistedintheformofinclusionbody．Analyzi

7、ngtheeffectofdifferentconcentrationofIPTGanddifferenttimeonexpressionproduct，andconfirmedthebestinducedconcentrationofIPTGandtime．ExperimentalresultsindicatedthatwhentheconcentrationofIPTGincreased，theproductshavenotincreased，andwiththetimepasttheproductsincreased．Theult

8、imaconcentrationofIPTGwas3mmol／Landtimewas9h，whichisbetterconditionwheninducedVPlprotein．Keywords：FMDVt