大鼠脑缺血再灌注中电针治疗对annexin+a1的调节作用

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1、华中科技大学硕士学位论文英文缩略词表(Abbreviation)PLA2phospholipaseA2PKCproteinkinaseCPKAproteinkinaseAMCAOmiddlecerebralarteyocclusionNFATnuclearfactorofactivateTcellAP-1activatorprotein-1PBMCperipheralbloodmononuclearcellFPRformylpeptidereceptorsPCRpolymerasechainreac

2、tionPBSphosphatebufferedsalineEDTAethylenediamineteraacceticacidATLaspirin-triggeredlipoxinsPMNpolymorphonuclearneutrophilALXR/FPRL1lipoxinA(4)receptorf-MLPformyl-Met-Leu-PheERKextracellularsignal-regulatedkinaseI独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研

3、究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式可标明。本人完全意识到,本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期:2007年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印

4、或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密,在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:2007年月日日期:2007年月日华中科技大学硕士学位论文前言缺血性脑血管疾病是导致全球人口死亡的三大疾病之一,其发病率死亡率和致残率很高。各种原因引起脑动脉血流中断,局部脑组织神经元缺血缺氧性变性坏死,继而出现相应神经元功能缺损,大鼠大脑中动脉栓塞MCAO(middlecerebralarteryocclusion)的局灶性脑缺血模型是应用最广泛的脑

5、缺血模型。其组织病理和行为学变化与人类缺血性脑卒中表现相似。电针作为中国传统的治疗方法,再脑缺血治疗中的显著疗效引起了研究者极大兴趣。电针可以促进卒中病人的语言、运动和记忆的恢复。脑缺血再灌注损伤是涉及自由基、钙离子、兴奋性氨基酸、等多方面因素对复杂的病理生理过程。各种原因引起脑动脉血流中断,局部脑组织神经元发生变性坏死和凋亡,继而出现相应神经功能缺损。在再灌注损伤过程中,机体内存在着损伤因素和保护因素的平衡,从而影响细胞存活的内外的一些促凋亡和抗凋亡因素。AnnexinA1是分子量为37kDa结构

6、相关钙依赖的磷脂结合蛋白,分子上有酪氨酸21激酶磷酸化位点(Tyr),以及PKA、PKC等蛋白激酶磷酸化位点.AnnexinA1组成性地表达于许多组织,参与膜转运及膜表面一系列依赖于钙调蛋白的活动,发挥调节细胞生长和分化,细胞凋亡和炎症等多种作用[1],有研究还显示,AnnexinA1在脑缺血再灌注中发挥着保护作用。但众多的资料显示Annexin蛋白也介导了细胞凋亡,本实验研究以AnnexinA1为技术指标,采用特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a抑制TrkA的生物学作用,旨在研究脑中风发病的病理生理过

7、程中AnnexinA1的作用和电针治疗脑中风的机制和作用途径。1华中科技大学硕士学位论文材料与方法1动物分组选用华中科技大学同济医学院实验动物中心提供的健康成年雄性S–D大鼠,体重200-250克,随机分组,每组5只:①正常对照组②缺血再灌组:缺血再灌注24h组③电针治疗组:缺血再灌注24h+电针组④DMSO组:缺血再灌注24h+电针+DMSO侧脑室注射组⑤K252a组:缺血再灌注24h+电针+K252a侧脑室注射组。2脑缺血模型制备及取材10%水合氯醛腹腔注射(350mg/kg)。用改良的线栓法制

8、作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。常规去毛消毒后,颈部正中切口暴露右侧颈总动脉,分离颈外动脉,结扎并切断,然后在其断端剪一小口插入一用火烧圆的市售直径Φ=0.205mm钓鱼线,轻推钓鱼线尾端,由颈外动脉通过分叉部进入颈内动脉,稍有阻力时停止前进以栓塞右大脑中动脉,以颈内动脉起始处开始计算线栓长度,栓长约18mm。栓塞30min后将线栓退至颈外动脉使血流再通,缝合切口后动物保温喂养24h。3主要试剂Mouse抗AnnexinA1单克隆抗体购自武汉基因公司,SantaCruz

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