泰山槐花多糖的提取及对鸡兔免疫增强作用的研究

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1、山东农业大学硕士学位论文泰山槐花多糖的提取及对鸡兔免疫增强作用的研究姓名：赵庆友申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：朱瑞良20120615山东农业人学硕上学位论文中文摘要槐花(RobiniaPseudoacaciaL．)为豆科蝶形花亚科刺槐属多年生落叶槐树所盛丌的鲜花。槐花始载于《贵州民间方药集》：“止大肠下血，咯血，又治妇女红崩”。槐花含有丰富的蛋白质、氨基酸、微量元素和维生素等物质，具有消痛化淤，清热解毒，疗Ⅱ冈治痔，健胃通肠等功效，主治咯血、大肠下血、崩漏，具有较高的药用价值。畜禽传染病严重危害畜牧产业的

2、健康发展，尤其是病毒性传染病，迄今尚无有效的治疗方法，疫苗预防仍是最重要的措施。由于各种原因，多数疫苗只有与免疫增强剂配合使用才具有良好的免疫效果。但是，目前国内外广泛使用的油乳类、铝胶类化学免疫增强剂副作用大，急需研制高效、低毒的新型免疫增强剂。目前已经证实多种中药多糖具有免疫增强作用，但关于槐花多糖的研究国内鲜有报道。本课题组采集泰山的新鲜槐花，烘干粉碎后用纤维素酶法提取粗多糖，并通过正交试验确定了酶解的最佳条件，用Sevage试剂除蛋白，保证了粗多糖较高的纯度。选取健康清洁的雏鸡和家兔为动物模型，研究槐花多糖的免

3、疫增强作用，为开发新型免疫增强剂提供试验依据。1．泰山槐花多糖的提取及测定探讨纤维素酶法提取槐花多糖的工艺条件。采用正交试验设计研究了提取温度、pH、酶用量和料液比等因素对槐花多糖提取率的影响，用Sevage法脱除槐花多糖所含的蛋白。结果，酶法提取槐花多糖的工艺条件为：料液比1：25，温度45℃，pH4．5，酶用量1．00％。该工艺下槐花多糖的得率为4．93％，多糖含量为76．4％。．2．泰山槐花多糖对雏鸡免疫增强作用的研究目的是为了研究槐花多糖对雏鸡的免疫调节作用。本研究选取240只健康雏鸡在免疫新城疫灭活苗前将不同

4、剂量的槐花多糖溶液皮下注入雏鸡体内，以生理盐水作对照。在免疫后7d，取脾脏、胸腺、法氏囊检测免疫器官指数。各组分别在免疫后3、7、14、21d采血，用B．微量法HA与HI检测血清抗体效价，全自动血细胞分析仪测定外周血白细胞数和淋巴细胞比率，ELISA方法检测小肠内SIgA的含量。结果显示：槐花多糖可促进雏鸡免疫器官的发育，增加外周血白细胞的数目和淋巴细胞比率，提高新城疫抗体效价，促进十二指肠内SIgA的分泌，200mg／ml剂量组多糖效果显著。结论，槐花多糖具有的免疫增泰山槐花多糖的提取及对鸡兔免疫增强作用的研究强活性

5、，有望开发为新型免疫增强剂。3．泰山槐花多糖对兔出血症病毒免疫原性的增强作用为了研究槐花多糖对兔出血症病毒(rabbitvirdhemorrhagicdiseasevirus，RHDV)的免疫增强作用。在兔出血症组织灭活疫苗中加入不同剂量的槐花多糖，制备成兔出血症槐花多糖灭活苗。选取体重lkg左右的健康獭兔84只，随机分为7组，其中I、II、III组为槐花多糖疫苗组，IV组为蜂胶疫苗对照组，V组为无多糖疫苗对照组，VI组和VII组分别为饲喂组和空白对照组，各组分别在免疫后0、3、7、14、21、28、35、42d采血，

6、用p．微量法HA与HI检测血清抗体效价，全自动血细胞分析仪测定外周血淋巴细胞数和淋巴细胞比率，试剂盒检测血清中IL．2的含量。结果显示：I、II、III、IV组各指标均高于V组，其中I、II、IV组显著高于V组(P<0．05)；I组显著高于II、III、VI组(P<0．05)，II组与III组总体差异不显著；IV组总体水平略低I组；饲喂组(VI)显著高于V组(P<0．05)，但显著低于槐花多糖I组(P<0．05)。表明槐花多糖能提高獭兔对兔出血症病毒的免疫功能，200mg剂量的效果显著，并且能够延缓兔出血症组织灭活苗的

7、免疫保护期。因此，槐花多糖具有很好的免疫增强功能，为槐花多糖开发为新型免疫佐剂和免疫增强剂奠定了基础。关键词：泰山槐花多糖；NDV：RHDV；淋巴细胞；slgA：IL．2；免疫增强作用2山东农业大学硕上学位论文AbstractBlacklocust(Robiniapseudoacacia￡．)，aLeguminosaePapilionoideaelocust，belongtoperennialdeciduousabor．Itnotonlycanstoplargeintestinebleedingandhemoptysi

8、s，butalsocantreatabnormalmenstruationwhichwasfirstlyrecordedinGuizhouFolkRecipeSet．Richinprotein，aminoacids，traceelements，vitaminsandothersubstances，BlacklocustCaneli