生物：52《多聚酶链式反应扩增dna片段》学案（2）（新人教版选修1）

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1、课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段学习目标：1、了解PCR技术的基本操作2、理解PCR的原理3、讨论PCR的应用重点：PCR的原理和PCR的基本操作难点：PCR的原理I.基础知识PCR技术扩增DNA的过程，与细胞内DNA复制过程类似:1.细胞内DNA复制条件分析：条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核昔酸合成DNA子链的原料酶解旋酶DNA聚合酶打开DNA双螺旋催化合成DNA子链能量ATP为解螺旋和合成子链供能引物RNA为DNA聚合酶提供合成的3'端起点2.细胞内DNA复制过程的解析：解旋：解旋酶、ATP,D5IA两条链打开，形成

2、两条DNA单链。引物结合：在D7A单链3'端与DNA反向配对结合。DNA聚合酶结合：DNA聚合酶与模板链结合，标志着单链合成开始。子链合成：DNA聚合酶从引物3'端开始，将配对的脱氧核甘酸连接起来。后续加工：DNA聚合酶I将引物切去，并合成空缺处的D7A单链，再hDNA连接酶将不连续的D7A子链连接起來（半不连续合成。先导链，滞后链）子链合成特点：o［思考］DNA分子能准确复制的原因有哪些？3.DNA分子复制的人工控制解开螺旋：在°C时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。恢复螺旋：在€左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。

3、复制条件：o反应场所：（自动温度周期性调节）。［思考］缓冲液相当细胞内的什么成分？（核基质）4.PCR的反应过程变性一►复性>延伸变性：在°C时DNA解旋复性：在°C时引物与DNA单链结合延仲：在°C时合成DNA子链（两个引物间的序列）II.实验操作（1）PCR反应体系：缓冲一液、,、、两种RNA引物，水（2）实验操作步骤①按照PCR反应体系配方配制反应液；②将PCR反应体系50UL用微量移液器转移到微量离心管（0.5mL）屮;③将微量离心管放到PCR仪中;④设置PCR仪的工作参数。⑤DNA在PCR仪屮大量扩增。2.4水浴法：将微型离心管依次在°C、

4、°C、°C的恒温水浴锅屮循坏处理相应时间。3.实验注意事项（1）避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸镭水等使用前高压灭菌。（2）缓冲液和酶分装成小份，一20°C低温保存。（3）每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。（4）混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。（三）课堂总结、点评多聚酶链式反应扩增DNA片段—►PCR原理一►DNA的复制需要酶、原料、能量、引物DNA的变性和复性受温度影响—►PCR过程一►变性一►复性一►—►操作步骤—►配制PCR反应体系—►延伸移入离心管放入PCRDNA扩增戸设置工作参数-►测定含量一►稀释一►调零一测定并

5、读数~~►计算（五）巩固练习1.DNA分子复制时，解旋的两条链中（）A仅一条作为复制模板B两条链作为模板并复制出两个不同的DNA分子C两条链作为模板并复制出两个相同的DNA分子D两条链作为模板，各自合成一条子链，然后两条母链重新结合为原来的双螺旋分子,两条新链结合成一个全新的DNA分子1.下列关于DNA复制过程的正确顺序是（）①互补碱基对之I'可氢键断裂②互补碱基对之间形成氢键③DNA分子在解旋酶的作用下解旋④以解旋后的母链为模板进行碱基互补配对⑤子链与母链盘旋成双螺旋状结构A①③④②⑤B①④②⑤③C①③⑤④②D③①④②⑤2.下列各项过程中，遵循“碱

6、基互补配对原则”的有（）©DNA复制②RNA复制③转录④翻译⑤逆转录A①②③④⑤B①②③④C①②③⑤D①③④⑤3.实验室内模拟生物体DNA的复制必需的一组条件是（）①酶②游离的脫氧核昔酸③ATP④DNA分子⑤rnRNA⑥tRNA⑦适宜的温度⑧适宜的酸碱度A①②③④⑤⑥B②③④⑤⑥⑦C②③④⑤⑦⑧D①②③④⑦⑧4.利用PCR技术，把一个双链DNA分子当作第一代，经过3次循环，在第四代DNA分子中，有儿条第一代脱氧核昔酸的长链？（）A2B46.关•于DNA分子的叙述屮，正确的是（）A.DNA的两条链是极性相同，同向平行C.DNA的两条链中极性不同，反向平

7、行的C8D16,B.DNA的两条链是极性相同，反向平行D.DNA的两条链是极性不同，同向平行7.假设PCR反应中，只有一个DNA的片段作为模板，请计算在30次循环后，反应物中大约有多少这样的DNA片段（）7.DNA的合成方向总是（厂延伸。A从DNA分子的左端向右端B从DNA分子的右端向左端C从子链的5,端向3,端D从子链的3,端向5,端9.要使PCR反应在体外的条件下顺利地进行，需要严格的控制（）A氧气的浓度B酸碱度C温度・D人气的湿度10.DNA分子经PCR反应循环一次后，新合成的那条子链的脱氧核昔酸的序列应与（）A模板母链相同B非模板母链相同C两

8、条模板母链相同D两条模板母链都不相同11.在（）的温度范围内，DNA的双螺旋结构解开A.10—2CTCB.8