sfrp2过表达对小鼠牙胚发育影响的初步研究

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1、福建师范大学硕士学位论文sFrp2过表达对小鼠牙胚发育影响的初步研究姓名：郑萍申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：张彦定20060401摘要捅姜Wnts基因家族编码数量庞大且分支众多的信号分子，涉及许多器官的模式形成及细胞的增殖和分化，其信号传导是通过Frizzled受体家族实现。分泌性Frizzled相关蛋白(thesecretedFrizzledrelatedprotein，sFrp)作为Wnt信号的可溶性调节因子，可能与细胞膜上的Frizzled受体竞争性结合Wnt信号分子。通过sFrp在胞外屏蔽Wnt信号，可以避免经典的Wnt／13．catenin途径或替代性扁平细胞

2、极性途径的激活。研究表明：在牙胚发育过程中，表达了一系列的gents及其拮抗物。并且本实验前期的研究结果表明：sFrp2在小鼠E11．5-E135的磨牙间充质中都有表达而在切牙中不表达(见附录图1)。另有报道：sFrp2在小鼠E14．5-E165d的磨牙间充质中也有表达，由此推测sFrp2的表达可能与磨牙的形成及牙齿类型的决定有相关。但迄今，sFrp2在牙胚发育过程中有何作用?还不清楚。因此，本研究以小鼠的牙齿发育为模型，通过在小鼠牙胚中过表达sFrp家族成员之一sFrp2，探讨sFrp2在牙齿发育中通过调控Wnt信号所起的作用。主要研究工作包括：利用慢性病毒载体三质粒系统pNL．E

3、GFP／pNL-EGFP—sFrp2、pVSVG、pHelper共转染293T包装细胞，生产EGFP．IRES2．sFrp2、EGFP慢性病毒并进行病毒的收集、冻存；用EGFP—IRES2-sFrp2慢性病毒感染E13．5小鼠磨牙间充质细胞，接着将感染病毒的间充质细胞重新聚合，并将重聚后的团块与E13．5牙上皮重组接着重组块移入小鼠肾囊膜培养。实验结果表明：在E13．5小鼠磨牙间充质中过表达sFrp2后牙齿大小、牙尖数日及形态结构都没有明显差异。关键词：牙齿发育，Wnt信号通路，sFrp，sFrp2，过表达，慢病毒载体福建师范大学硕士学位论文AbstractThevertebrate

4、Wntgenefamilyrepresentsalargeanddiversegroupofsignalingmoleculesinvolvedinthepatterning，proliferationanddifferentiationofavarietyoforgansandcelltypes．11lcysignalthroughtheFrizzledfamilyofreceptors．IthasbecomeclearthatsecretedWntantagonistsplayimportantrolesinregulatingWntsignaling．Membersofthes

5、ecretedFrizzled-relatedprotein(thesecretedFrizzledrelatedprotein,sF讷familyappeartofunctionassolublemodulatorsofWritsignaling，presumablybycompetingwithmembraneFrizzledreceptorsforthebindingofsecretedWntligands．sFrpsequesterWntsintheextracellularspace，preventingactivationofboththecanonicalandthep

6、lanarpolarityWntpathways．Inthisessay,weusemousetoothdevelopmentasamodelinwhichoverexpressionofsFrp2wasperformedtostudyitsfunctioninregulatingWntpathway．Firstly,lentivirusvectors(threeplasmidspNL-EGFP／pNL-EGFP-IRES2-sFrp2、pvsv(三pHelper)wereexploitedtotransfect293TpackagingcelllinestoproduceEGFP-

7、IRES2-sFrp2IJentivirus．Secondly，mousemolarmesenchymalcellsinfectedbyEGFP·IRES2-sFrp2Le以vimswererecombinedwimdentalepitheliumtoinvestigatetheeffectsofoverexpressionofsFrp2Oiltoothdevelopment．Theseresultsshowedthat：asaresultofsFrp2o