（果树学专业论文）砂梨组织培养及遗传转化研究

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1、浙江火学硕L学位论文(2005)摘要梨(PyFUSspp．)是世界性重要果树，我国是梨主产国。梨果色、香、味、质俱佳，很受消费者欢迎，在果品市场占据重要地位。砂梨(PyruspyrifoliaNakai)品种早实性较强、抗热、抗火疫病能力强。但现有的砂梨品种还存在很多不足之处，如对霜害的抗性差、抗病性不强、果实外观较差等。随着现代生物技术的发展，植物转基因技术已得到广泛应用，使通过生物工程方法培育具有优良性状的果树新品种成为可能。因此本研究也运用这一思路开展砂梨组培与转基因研究。奉研究以我国南方砂梨主栽品种翠冠、雪青、西子绿为

2、试材，建立了砂梨叶片再生体系，并在此基础上，初步研究了砂梨叶片农杆菌介导的条件，旨在探索砂梨根癌农杆菌介导的遗传转化方法。主要研J究结果如下：1．以翠冠、雪青、西子绿3个砂梨栽培品种为试材，研究了品种、暗培养时间、不同激素配比、培养基类型、硝酸银、糖源、损伤方式等对砂梨叶片再生能力的影响。结果表明：翠冠的再生能力最强，其次为雪青，西子绿最差；⋯定时期的暗培养是翠冠叶片再生的必要条件；NAA浓度不变，BA浓度在3．7mg／L之间变化时，翠冠离体叶片再生频率有提高的趋势：TDZ对翠冠离体叶片再生不定梢促进作用甚小；常规培养基MS最

3、适于砂梨品种翠冠的再生；AgN03浓度在0．1—0．5mg／L对叶片再生有一定的促进作用。2．对翠冠再生过程不同时期的叶片样品进行扫描电子显微镜观察，结果表明在试验开始的10d后就出现了类分生组织结构，在2个月后观察到充分发育的梢，且最终形成的梢的数量远少于所形成的分生组织数量。3．通过Cef对翠冠叶片愈伤组织诱导及不定梢分化的影响实验以及叶片对Kan抗性预备实验，基本上确定遗传转化中抗生素最佳使用浓度为Cef200mg／L、Kan25mg，L。以砂梨品种翠冠叶片为根癌农杆菌介导转化受体，感染了近干张叶片，但由于其再生频率太低

4、，目前尚未得到抗性芽。初步探索了甘露糖对砂梨愈伤组织诱导及不定梢分化的影响，发现三个品种均1i能利用甘露糖，因而具备应用磷酸甘露糖异构酶(PMD筛选体系的前提条件。本研究首次利用扫描电子显微技术对砂梨叶片不定梢再生过程进行了观察，有助于我们更加绌致地从形态学上了解器官再生的动态过程，以寻求最佳途径提高不定梢的再生频率。浙江大半硕{：学位论文(2005)梨树基因转化工作难度较大，进展相当缓慢，目前国内尚未有关于梨树转基因的报道。国外少量相关报道也仅限于西洋梨和豆梨。奉研究首次探讨了砂梨遗传转化条件，初步筛选出适合我国南方主栽品种

5、翠冠的抗生素使用浓度，可能对其它梨品种的遗传转化也有一定的借鉴作用。浙江人学硕士学位论文(2005)ABSTRACTPear(Vyrgsspp．)isoneofthemostimportantfruitsintheworldandalsoafamousfruitinChina．ExceUentquality,attractivecolor,goodtasteandmarvelousfragrancemakeitapoplularfruitinthemarket．Sandpear(PyruspyrifoliaNakal)cult

6、ivarsalsohaveothercharacteristicssuchasearlierfruitripening，anti—heatandanti—fireblight．Butmostcultivarsofsandpearstillhavealotofshortagessuchassensitivetofrostanddiseases，badapperanceoffruitandsoon．Withthedevelopmentofbiotechlolgy，plantgenetransfertechniquehasbeenu

7、sedfarandwidely．SoItappearspromisingthatbreedingfruitnewcultivarwithexcellenttraitsbybiotechlolgy．Sothisresearchdescribedsandpeartissuecultureandgenetransformationtechnique．Shootswereregeneratedfromtheyoungleavesofsandpearcv．‘cuiguan’，‘xueqing’．Basedonregenrationsys

8、tem，theconditionofAgrobacterium—mediatedtransformationwereexplored．Theresultsweresummarizedbelow．1．Adventitiousshootregenerationfromin—vit