农杆菌介导的抗逆基因gmgt-2a及抗草甘膦标记基因cp4-epsps转化大豆的研究

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1、硕士学位论文万方数据指导教师姓名、职称苤盘垡盟究虽单位地址———直江娅菹盔堂化堂皇．生佥型兰丝．院申请学位级别一一互L±专业植物堂论文提交时间2Q!皇：呈：至Q论文答辩时间蛩2垒：§：≥2学位授予单位与日期逝江娅范盔堂答辩委员会主席一．一．互鲞瀣熬援论文评阅人万方数据DissertationforMasterDegreeGENETICTRANSFoRMATIoNoFGmG互r2彳GENEANDCP扣E只S尸：SGENE玎qToSoYBEANBYAGROBACTERIUM．MEDIATEDTRANSFoRMATloNCandidate：VanjieLiSuper

2、visor：Prof．DanhuaZhuDiscipline：BotanyCollegeofChemistry＆LifeScience，ZhejiangNormalUniversity，Jinhua321004，ZhejiangCompletedinMarch20，2014．CommencementinMay19,2014．万方数据本研究得到农业部转基因生物新品种培育重大专项(2012ZX08009004)和(2013ZX080004002)的资助。研究工作在浙江省农业科学院“杭州国家大豆改良分中心”完成。Thisworkwasfinanciallysuppo

3、rtedbyTransgenicBiologicalVarietyProject(2012ZX08009004and2013ZX080004002)inthechargeofMinistryofAgricultureofthePeople’SRepublicofChina．ThisworkwascarriedoutinHangzhousub-centerofnationalsoybeanimprovementinZhejiangAcademyofAgriculturalSciences．万方数据农杆菌介导的抗逆基因GmGT-2A及抗草甘膦标记基因CP4-EPS

4、PS转化大豆的研究摘要大豆是重要的经济作物之一，是植物油及植物性蛋白等营养素的重要来源。近年来由于受到国外进口转基因大豆的影响，我国的大豆种植面积不断减少，面临着严重的产业危机。大豆的生长发育很容易受到外界环境的影响，环境中的诸多非生物因素如盐碱、干旱、低温等逆境胁迫会影响大豆的生长发育过程，严重时甚至会导致大规模减产。针对上述难题，除了可通过传统育种的方法来增加大豆单产水平，还可以利用基因工程培育抗逆性新品种，从而使之更好地适应不同的生长环境，进而可以在不与主要粮食争田的情况下拓展大豆的种植面积，这对提高大豆的总产量具有非常重要的意义。本研究首先构建了含抗草

5、甘膦标记基因的植物表达载体pES002，再将Trihelix家族类转录因子GmGT-2A基因克隆到植物表达载体pES002上；而后以浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所杭州国家大豆改良分中心保存的‘华春6号’、‘浙春3号’、‘0428’三个品种为受体材料，分别使用子叶节和胚尖作为遗传转化体系的外植体，将植物表达载体pES002．GmGT-2A导入到大豆基因组中，以期获得抗逆性明显提高的大豆新种质。本研究主要取得了如下实验结果：1、植物表达载体的构建及转化验证。以植物表达载体pBA002为基础载体，使用抗草甘膦CP4-EPSPS基因替换原载体的Bar筛选标记基

6、因，获得新的植物表达载体pES002。将大豆耐逆相关Trihelix类转录因子GmGT-2A连接到pES002，构建了同时含耐逆相关基因和抗除草剂标记基因的植物表达载体pES002一GmGT-2A。利用农杆菌介导的花序浸润法转化拟南芥，并对转基因植株进行抗草甘膦和耐盐性鉴定。结果表明，转基因植株在抗草甘膦和耐盐性上均显著强于对照，表明该载体可以用于转基因相关的基因功能研究。2、农杆菌介导的大豆遗传转化。本研究分别以三个大豆品种。0428’、‘浙万方数据春3号’、‘华春6号’的子叶节和胚尖作为受体材料，通过农杆菌介导的子叶节法和胚尖法对上述受体材料进行了遗传转化

7、。转化后的植株经目的基因GmGT-2A和筛选标记基因CP4-EPSPS的PCR检测、构建特异性PCR检测以及草甘膦的喷施筛选，To代93株为转基因阳性，Tl代26个株系PCR检测为阳性，表现抗草甘膦。结果表明上述两种基因已经成功地整合到了大豆的基因组中。关键词：大豆；农杆菌介导法；转录因子；表达载体；子叶节；胚尖万方数据GENETICTRANSFORMATl0NOFGmGT-2AGENEAND(=!尸4一E只野强GENEINT0SOYBEANBYAGROBACTEIUUM．MEDIATEDTRANSFOI己MATl0NABSTRACTSoybean(G纱cme

8、max(L．)．Merr)asoneo