三种虫草属真菌金属硫蛋白性质研究

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1、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其它人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得云洼王些太堂或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：乌k瑛签字日期：20牌2月矸同学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解云洼王些太堂有关保留、使用学位论文的规定。特授权云洼王些太堂可以将学位元论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学

2、校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。(保密的学位论文在解密后适用本授权说明)学位论文作者签名：祆琪导师躲k签字日期：幻阡年2月矸同签字同期：如仟年2月斗日学位论文的主要创新点一、本研究采用虫草属真菌作为诱导合成金属硫蛋白的材料；二、本研究运用简化的金属硫蛋白提取工艺对虫草属真菌金属硫蛋白进行提纯；三、本研究运用电喷雾质谱法测定金属硫蛋白的分子量，并对虫草金属硫蛋白的氨基酸组成进行了测定；四、明确了虫草金属硫蛋白对自由基的清除作用。摘要金属硫蛋白是一类广泛存在于动物、植物、微生物体内，具有低分子量、高巯基含量，能大量结合重金属离子的活性蛋白质。蛹虫草以15g·L。Zn2

3、+在10L发酵罐中诱导培养56h后收集，产率为每升发酵液收集12．021g菌丝体(干重)；亚香棒蛹虫草以18g·L。Zn2+在10L发酵罐中诱导培养64h后收集菌丝体，产率为每升发酵液收集12．164g菌丝体(干重)；九州虫草以15g·L。Zn2+在10L发酵罐中诱导培养56h后收集，产率为每升发酵液收集16．921g菌丝体(干重)。细胞破碎取上清液通过两次凝胶柱层析，冷冻干燥得到三种虫草金属硫蛋白纯品。利用考马斯亮蓝法(Bradford法)进行纯度鉴定，运用银饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT含量，利用Ellman’S方法和火焰原子吸收法分别测得巯基含量和结合锌原子

4、数，运用电喷雾质谱法测得分子量，利用全自动氨基酸分析仪测定氨基酸组成。发酵终点处蛹虫草金属硫蛋白、亚香棒虫草金属硫蛋白、九州虫草金属硫蛋白的产量分别为12．876mg／g菌丝体(湿重)、15。335mg／g菌丝体湿重、14．335mg／g菌丝体(湿重)，分子量分别为7390D、7680D、6500D，每分子蛋白质含巯基数分别为14个、18个、20个，每分子蛋白质结合Zn原子数分别为5个、4个、6个。氨基酸组成分析结果显示，每分子蛹虫草金属硫蛋白共含57个氨基酸，其中含有13个半胱氨酸，疏水氨基酸占29．8％，且含有组氨酸；每分子亚香棒虫草金属硫蛋白共含60个氨基酸，其中含有15

5、个半胱氨酸，疏水氨基酸占22．7％，且含有组氨酸和芳香族氨基酸：每分子九州虫草金属硫蛋白共含54个氨基酸，其中含有20个半胱氨酸，疏水氨基酸占19．6％，且含有1个组氨酸。从半数清除率浓度来看，三种虫草总还原能力的大小：九州虫草金属硫蛋f3>亚香棒虫草金属硫蛋白>蛹虫草金属硫蛋白；九州虫草Zn．MT与谷胱甘肽清除羟基自由基的能力相当，强于亚香棒Zn．MT和蛹虫草Zn．MT，而亚香棒Zn．MT强于蛹虫草Zn．MT；九州虫草Zn．MT对超氧阴离子自由基的清除能力是谷胱甘肽的1．3倍，亚香棒虫草Zn—MT的清除能力与谷胱甘肽相当，而蛹虫草Zn．MT的清除能力则较弱于前三者：亚香棒虫草

6、Zn．MT、九州虫草Zn．MT与谷胱甘肽清除DPPH自由基的能力相当，蛹虫草Zn．MT清除DPPH自由基的能力较强。关键词：蛹虫草，亚香棒虫草，九州虫草，金属硫蛋白AbstractMetallothionein(MT)，whichwidelydistributeinanimals，plantsandmicroorganisms，isasuper—familyoflowmolecularweight，highthiolatesulfurandmetalcontent(suchaszinc，copper)activeproteins．CordycepsmilitarisZn—met

7、allothioneinwasyieldedupto12．876mg／gmycelium(wetweight)谢tllazincconcentrationof15g／Landfungalbiomassreached12．021gmattheendofthefermentationin56h．Cordycepshawkesiimyceliaachievedmaximumbiomassupto12．164g。L_谢t11zincionconcentrationof18g。L叫i111OLferm