伏隔核gaba能神经元对可卡因环境相关记忆的调控作用及其神经环路机制研究

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1、後旦大学万方数据学校代码：10246学号：10111010072博士学位论文伏隔核GABA能神经元对可卡因环境相关记忆的调控作用及其神经环路机制研究AStudyontheRoleandNeuralCircuitMechanismofNAcGABAergicNeuronsintheCocaine--context·-associatedMemory院系(所)：基础医学院专业：药理学姓名：指导教师：王丽马兰教授王菲菲副教授二L习FjF昌U教王曼完成日期：2014年4月10日万方数据复旦大学博士学位论文NAcGABA能神经元对可卡因环境相关记忆

2、调控的研竞目I

3、IIIIIIIIIIIIIIIIIl录Y2865916英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5前材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯儿实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20讨参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯51附录综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58发表论文及获奖

4、情况．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯70致万方数据复旦大学博士学位论文NAcGABA能神经元对可卡因环境相关记忆调控的研究Amy-Amygdala杏仁核英文缩写BLA．basolateralamygdala基底外侧杏仁核CEm：themedialsubdivision中央内侧杏仁核ChR2：channelrhodopsin-2视紫红质通道蛋白CPP：Conditionedplacepreference条件性位置偏爱GAD67：Glutamatedecarboxylase67谷氨酸脱羧酶MSN：mediumspinyneurons

5、中间棘神经元NAc：Nucleusaccumbens伏隔核NpHR：halorhodopsin嗜盐菌紫质RT-PCR：RealtimePCR实时荧光定量聚合酶链式反应SN：substantianigra黑质VGAT：vesicularGABAtransporter氨基丁酸转运蛋白VP：ventralpallidum腹侧苍白球VTA：ventraltegmentalarea腹侧被盖区WT：Wildtype野生型2万方数据复旦大学博士学位论文NAcGABA能神经元对可卡固环境相关记忆调控的研究中文摘要伏隔核(Nucleusaccumbens，

6、NAc)是成瘾性药物的主要调控脑区，由95％的GABA能中间棘神经元(mediumspinyneurons。MSNs)组成，因表达不同的D1和D2多巴胺受体分为D1+和D2+MSNs。DI+MSNs年I]D2+MSNs都是投射神经元，DI+和D2+MSNs都投射到腹侧苍白球(Ventralpallidum，VP)，同时DI+MSNs也直接投射到黑质(substantianigra，SNr)和腹侧被盖区(ventraltegmentalarea，VTA)等中脑相关脑区。DI+MSNs币I]D2+MSNs及其神经元投射脑区在奖赏和厌恶性学习都

7、起到关键性作用，因此研究NAcGABA能神经元在药物奖赏相关环境记忆表达中的作用及解析该过程中NAcGABA=}O经元和其投射的下游脑区神经元活性改变，对探索药物环境相关线索诱发的动机行为表达非常重要。光遗传学技术是通过结合组织和细胞特异性表达光敏蛋白即视蛋白和先进的光学方法来影响，记录和控制特异性细胞活性的方法。与传统的神经系统研究方法如电生理技术、神经药理学方法相比，这一方法具有更高的空间选择性、特异性，和时间上的精确性。利用光遗传学技术可以准确、可逆地在自由活动的实验动物中对大脑相关核团特异神经元活性和神经环路进行实时操控，为奖赏行

8、为的神经环路机制研究带来突破性进展。研究NAcGABA能神经元在药物奖赏相关环境记忆表达中的作用及神经机制，就需要利用光遗传学技术在奖赏环境相关记忆行为中对小鼠NAcGABA能神经元进行实时在体操控来进行研究。本论文利用囊泡氨基丁酸转运体(vesicularGABAtransporter，VGAT)驱动表达光敏蛋白ChR2(H134R)和EYFP融合蛋白的VGAT-ChR2(H134R)．EYFP小鼠进行研究，发现该小鼠伏隔核有适量ChR2(H134R)．EYFP表达，并且伏隔核表达了ChR2(H134R)．EYFP的神经元都和GABA能

9、神经元标记物谷氨酸脱羧酶(Glutamatedecarboxylase67，GAD67)有共定位，表明NAc这些表达ChR2(H134R)．EYFP的神经元是GABA能神经元。给予一系列1秒和