人工繁殖南方鲇性别决定与分化相关因子的初步研究

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1、西南师范大学硕士学位论文人工繁殖南方鲇性别决定与分化相关因子的初步研究姓名：张修月申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：王德寿20050401人工繁殖南方鲇性别决定与分化相关因子的初步研究学科专业；承生生物学指导教师：正德寿研究方肉：鱼类生殖生理及分子内分泌学作者；张修月内褰摘要人工繁礅的南方鲇(Silurusmeridionalis)为全雌种群，而自然繁殖的南方鲇性眈约为l：l。本实验塞已脊的研究表明，光照、饵料以及孵化后温度对南方鲒谯掰分健没毒影嫡，耀激素在南方熬蛙裂分诧中毒重要终曩，嚣雄激素没誊珏谚影穗。嚣蓠人工繁殖南方鲇全雌化和性腺分

2、化的机制依然不清楚。本研究使用雅激素合成酶⋯芳香fE酶抑制剂(Fadrozole)、雅激素蹙体搞抗剂(Tamoxifen)戏人王孵纯豹藤方鲢幼鱼避行雄瞧位诱譬处理(13缀)，获得雄鱼。瓣孵化后5—130d朐南方鲇幼鱼性腺进行系统的组织学观察，结果表明：在本实验条件下，南方鳐憔腺分化发生在孵化后7d旋右，举期雌雄性腺横切面的形状麓异显著，雅位性艨横切蕊粗短，溃嫠键嚣，约在黪纯嚣糕左舂其端熬形戏鼹令突起，在孵化嚣12d左右两个突起融合形成卵巢腔；雄性性腺横切面细长，端部尖直，凭任何必起，在雄性性腺发育盼簸个过程中郡保持这一形状。雌雄性分化过程麓异明照，

3、雌建郛巢脏在孵纯嚣12d左蠢形成，生毽缍貔在孵诬藤29d发表开始进孬蠢丝分裂，35d左右恢逮增殖，成熟分裂最早发生在孵化后55d左右；而雄鱼性腺约在孵化聪85d发右才肖少爨的生猜缅镌开始有丝分裂，在130d左右快速增殖，成熟分裂疑早发生在孵化后130d志右。雄性蛙艨分纯睾予攘链。通过对南方鲇孵化后5～130d性腺的组织学观察表明，在雌性性腺分化后，羁没有向雄健性逆转的迹敷，而已有的研究也表明，4~7月龄自然繁殖的南方鲐幼鱼住眈约为l；l，这滋秘塞然繁整审毒方鲇发生性逆转瓣霹翡控缀小，毒方站自然群尊◇接近1：l的性比并不悬性分化后性逆转产生的，而是在

4、性别分化时或之前就决定了。因而人工繁殖南方鲇的全雌化也可能是在性分化期间或之前，由于生态因予的作用雨零

5、起翡。已寿熬磅窕袋弱，孵往嚣毙嚣、撰糕、键莠零瀣慰褰方鲢数缝裂分捉没蠢影响(本实验室束发表资料)，为了避一步确定在人工繁殖中，是否由于受精条件的改理学硪士学位论文：人工繁殖南方懿饿别决定与分化襁关西子的搦疹研究变诱发了南方鲇的雌核发育或在干法授精中商浓度的卵巢液物质，特别是酸性物质是否酸菇了含有Y烫色体戆穗予鼹嚣导致了懑方鲢麴全壤豫，本谚究懑露了毒方鲢受精细胞学观察和稀释卵巢液物质湿法授精实验。使用嘉陵敬江水将剐挤出的成熟良好的南方鲇卵子殿卵巢液

6、物质分别稀释2储、5糖、{00薅蓐逡纷浸法授穰，幼鱼饲养至孵鼗蓐130d酲遴行经爱鉴定，没发瑗雄惫，该实验结果表明，原人工繁殖中采用的干法授精不是造成南方鲇人工繁殖后代全雌化的主要因素。遴逮在17℃秘24℃隶瀑条襻下受禧静态方鲢受精绥稳学蕊察表秘，在17℃瓣条件下，精子约在鼹精后20s进入卵子细胞质，约在受精届25rain形成雄性原核，卵予约在受精后20min左右形成第二极体，并排出体外，雌性原核约在受糟后25min友荫影藏，鼹雄琢棱缝在受精屠40--45min嚣始接魅蒡部分融合，鲍在受糖螽50min，羧雄原核完全融合形成合子核。24℃条件下除了雌

7、雄原核的形成和融合时间要早一赡外，其它受精细胞学程序与17℃基本一样，遮表明，人工煞殖南方鲇具有正常的受精缀麓学程彦，入誓繁建毫方熬戆全避诧苓跫痰专：鲢菝发鸯簿致夔。为了进一拶探索南方鲇性别分化的机制，研究了性腺分化早期促性腺激索(gonadotropinhormone，GtH)在南方鲇脯疆体的表达。用RT—PCR的方法克隆了南方懿G疆a受蓦、FSH多妥蘩耨LH§耍基cDNAs(三个黢基cDNA静羧营酸旁捌溅提交GenBank．熊序列号为，0tHsubunita{AY973舛5；LHsubunit罄：AY973946；FSHsubunit8：AY9

8、73947)。采用半定量RT．PCR的方i蠢测定了南方鲇性腺分化早期GtH静表达，缝栗表鞠GtH在往来势建亵裁毒表这，程毪裂势纯貔笑键跨蘩表达上调。这说明GtH在南方鲇性剐分化中可能嶷有重要作用，环境对南方鲇性别分化的影响W能通过脑一瓣体一性腺轴越作用。关键诿：枣方赘入工授携受耱缳蒡鏊学羲豫分{乏诞牲骤激素2理学硕士学位论文：人工繁殖南方鲇性别决定与分化相关因子的初步研究Primarystudiesonseveralfactorspossiblyinvolvedinthegonadalsexdeterminationanddifferentiati

9、onofsoutherncatfish，Major：HydrobiologyTutor：WangDeshouSpecial