可移动元件整合子与细菌多重耐药性的关系研究

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1、万方数据中图分类号UDCIⅥ46．561O硕士学位论文学校代码!Q533密级公开可移动元件整合子与细菌多重耐药性的关系研究Studyontherelationshipbetweenthemobilegeneticelementsandthemulti--drugresistanceofbacteria作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：袁璐临床医学临床检验诊断学湘雅三医院伍勇论文答辩日期翌!竖：三：>≯答辩委员会主席中南大学2014年5月万方数据学位论文原创性声明IllIllllllqlkll4lllllllllllllllllL

2、IllllllUlY2684199本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：孟塑曼日期：丝!业年』月旦日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构

3、送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：壶监导师签名El期：韭年上月业日万方数据可移动元件整合子与细菌多重耐药性的关系研究摘要目的：调查多重耐药铜绿假单胞菌株中可移动性遗传元件的分布情况，并以整合子为对象深入研究，探究整合子中不同可变区启动子P。。。对耐药基因盒和整合酶的表达以及整合频率的影响，了解启动子P。。。在整合子介导的耐药机制中的作用，从而为控制细菌广泛耐药和新型抗菌药物的研

4、发提供一定的理论基础。方法：从临床标本中分离并筛选出49株多重耐药的铜绿假单胞菌，采用聚合酶链反应(PCR)分析21种可移动遗传元件的分布情况，并对可移动元件的组合形式进行分析；构建高表达整合酶基因的重组质粒pET-INT和同时含有无耐药基因盒整合子和aadA2基因盒的重组质粒pACYC-IN-AAD，通过表型筛选法测定其整合频率；通过点突变法构建含有不同可变区启动子的重组质粒，通过实时荧光定量PCR比较其aadA2基因和intll基因的表达量。结果：49株多重耐药铜绿假单胞菌菌株中，共检出11种可移动遗传元件相关遗传标记基因，4个种类的可移动性遗传

5、元件均有检出。阳性率最高的为IS26(77．6％)，其次为intll(67％)。于国内首次在多重耐药铜绿假单胞菌中检出traF基因；本研究成功构建了整合子剪切和捕获耐药基因盒的体外模型，研究发现，在BL21(DE3)菌株中，含有高表达整合酶的整合子对耐药基因盒的整合能力是无高表达整合酶整合子的9．41倍；不同可变区启动子下游基因盒中基因的转录水平有显著差异，4种质粒的aadA2基因转录水平从高到低依次为：MU2)pACYC—IN—AAD>MU3>MUl，最高者是最低者的114．7倍。结论：可移动遗传元件在铜绿假单胞菌株中广泛存在，插入序列和整合子在其

6、耐药基因水平传播中起主要的作用。可变区启动子的启动强度与下游的耐药基因盒表达水平关系密切，启动强度越高，基因盒表达越强，反之亦然。图14幅，表14个，参考文献42篇。关键字：多重耐药；可移动元件；整合子；启动子；基因盒分类号：R446．5II万方数据Studyontherelationshipbetweenthemobilegeneticelementsandthemulti-drugresistanceofbacteriaAbstractObjective：Toinvestigatetheexistenceofthemobilegeneticele

7、mentsinthemulti．drugresistantstrainsofReudomonasaeruginosa．Identifytheimpactofthedifferentpromotersontheintegratedefficiencyandtheexpressionofthegenecassetteinclass1integron．Methods：49strainsofmulti．drugresistantPseudomonasAeruginosawereisolatedfromtheclinicaldepartments．Analyz

8、ethepresenceof21kindsofmobilegeneticelementsbypolymera