mir-101靶向调节girdin表达抑制肝癌细胞增殖及侵袭转移研究

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1、万方数据中图分类号：UDCR735．7616．006硕士学位论文学校代码!Q§33密级公珏miR-lOl靶向调节Girdin表达抑制肝癌细胞增殖及侵袭转移的研究miR-101inhibitshumanhepatocellularcarcinomacellproliferationandinvasionbyregulatingGirdin作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：赵勇临床医学肿瘤学湘雅三医院曹培国教授曹科副研究员论文答辩日期!：兰!茸答辩委员会主席_[堡鱼篁中南大学2014年5月万方数据学位论文原创性声

2、明IYlllllJt2llqllll魁lllllllqlllllllll9lllllU0llllll7lllll本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：—兰垒学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、

3、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：≮嘎导师签日期：』L年二月兰日日期：生L年二月尘万方数据miR-101靶向调节Girdin表达抑制肝癌细胞增殖及侵袭转移的研究摘要目的：我们先前的研究证实了Girdin蛋白在肝癌中高表达，本研究旨在探索在肝癌中Girdin高表达的原因，并证明miR-101确实能通过靶向调控Gird

4、in的表达而发挥抑制肝癌细胞增殖及侵袭转移的作用。方法：(1)采用qRT-PCR法分别检测肝癌及癌旁组织GirdinmRNA的表达水平；(2)通过Targetscan、miRanda预测调控Girdin表达的miRNA；(3)qRT-PCR法分别检验肝癌及癌旁组织miR-101的表达水平；(4)使用qRT-PCR、Westernblot法分别检测转染miR-101对HEPG2细胞GirdinmRNA及蛋白表达水平的影响；(5)先行构建Girdin一3'UTR质粒，再将质粒及miR-101mimics转染至HEPG2细胞；行双荧光素酶检测验证G

5、irdin是否为miR-101的直接靶基因；(6)使用CCK法测验miR-101对HEPG2细胞增殖能力的影响；(7)运用细胞划痕法检测miR-101对HEPG2细胞迁移能力的影响；(8)应用Transwell实验检验miR-101对HepG2细胞侵袭能力的影响。结果：(1)GirdinmRNA在肝癌组织的表达高于癌旁组织；(2)Targetscan、miRanda软件示Girdin．3’UTR有miR-101的结合区域；(3)miR-101在肝癌组织的表达低于癌旁组织；(4)转染miR-101后的HEPG2细胞GirdinmRNA及蛋白表达

6、水平下调；(5)双荧光素酶实验示转染miR-101能抑$1JGirdin．3’UTR荧光素酶活性；(6)转染miR-101后HEPG2细胞的增殖能力减弱；(7)转染miR-101后HEPG2细胞的迁移能力减弱；(8)转染miR．101后HEPG2细胞的侵袭能力减弱。结论：(1)Girdin在肝癌中高表达，其部分原因为直接调控其表达的miR-101在肝癌中低表达；(2)肝癌中miR-101可能通过直接靶向调控Girdin来抑制肝癌细胞的增殖和侵袭转移。图26幅，表9个，参考文献58篇关键词：miR-101；Girdin；原发性肝癌细胞；增殖；侵

7、袭转移分类号：R735万方数据硕士学位论文英文摘要miR-lOlinhibitshumanhepatocellularcarcinomacellproliferationandinvasionbyregulatingGirdinrOllteratlonanVaonnlAbstractObiective：OurpreviousstudieshaveconfirmedthattheGirdiniShi曲lyexpressedinhepatocellularcarcinomatissues，thisstudyaimstoexplorewhyGird

8、inishighlyexpressedinhepatocellularcarcinoma，andconfirmthatmiR一101canspecificityre