大熊猫(ailuropoda melanoleuca)粪便类固醇激素检测方法及其在放归种群中应用的初步研究

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1、ThePreliminaryStudyofFecalSteroidHormoneAnalysisandItsApplicationinGiantPanda似iluropodamelanoleuca)byBIWenleiAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofScienceZoologylnCentralSouthUniversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistrictChangshaH

2、unan410004，P．R．CHINASupervisorProfessorXi￡／ngZuofuProfessorQiDunwuMay,2014中本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：坤躲加f缈年F月雩D日中南林业科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全

3、了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：1、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密口。。(请您在以上相应方框打“√”)作者签名：肆◆恳镌导师签名：向A席伽f峰年土月5。日弘14"年．4-月扣日摘要动物生存环境的变化通常可以视作一种环境胁迫，这种胁迫通常刺激下丘脑．腺垂体．性腺／肾上腺轴分泌多种激素(如促肾上腺皮质激素、去甲肾上腺素、催乳素等)，

4、导致野生动物体内的多种固醇类激素(应激激素和肾上腺激素)的升高／降低，而其变化程度则是动物适应环境的一种能力体现。因此，应用生理学技术手段监测动物体内分泌状态不仅对于动物的医疗有效，而且对野生动物的保护与管理也很有益处。一般地，由于在应用生理学技术手段的过程中，取样的过程(如抽取血液)通常会给野生动物带来伤害，因此样品获得的难度限制了生理学技术手段在野生动物的研究、保护与管理中的应用。大熊猫(Ailuropodamelanoleuca)是中国特有的珍稀动物，其濒危现状在世界范围内引起高度关注，通过生理监测手段了解大熊猫的野外生存状态、对环境适应性能力对制定合理的保护措施非常必

5、要。为获得大熊猫粪便类固醇激素检测的稳定方法，本研究通过使用酶联免疫吸附测定(EnzymeLinkedImmunosorbentassay,ELISA)、放射性免疫分析(Radioimmunoassay，RIA)等技术比较分析，探讨了大熊猫粪便样品类固醇激素保存的时效性、样品取样量对检测结果的准确性影响，并对放归个体(种群)相关激素水平变化监测进行了初步应用。1．野生动物类固醇激素的监测有助于了解和改善动物的生存环境、繁殖生态，对濒危野生动物的迁地保护与管理尤为有益，而粪便样品类固醇激素保存时效性、检测准确性的确定将为其提供科学依据。以成都大熊猫繁育研究基地的25只圈养大熊猫

6、个体为研究对象，对其粪便类固醇激素保存时效性和样品取样量对检测准确性的影响进行研究。结果表明：在相对恒定条件下(134-2℃)，雄性皮质醇可稳定保存2d(F=6．08，P<0．05)，睾酮在15d内未出现显著性变化(F=0．813，P>O．05)；而雌性皮质醇可稳定保存3d(F=5．96，P<0．05)，孕酮可稳定保存2d(F=2．365，P<0．05)；此外，以1只成年雌性大熊猫个体(北川)为研究对象，基于两种取样量(0．5g和O．2g)的激素检测结果差异显著(p=O．000)。2．动物生存环境的变化引起内分泌变化，其变化程度是动物适应环境的一种能力体现。以成都大熊猫繁育研

7、究基地迁入都江堰野放繁育研究中心的6只亚成年大熊猫个体为研究对象，利用酶联免疫吸附法检测其粪便中皮质醇激素，验证饲养环境改变是否引起其激素水平变化。结果表明：一方面，研究个体在迁入后的皮质醇水平较迁入前均呈明显下降趋势(p<0．01)；另一方面，不同年龄和性别间，呈现年龄越小则变化越明显，说明环境变化可能是引起其皮质醇变化的原因之一，即年龄越小这种环境引起的应激性越明显。3．野外放归大熊猫“张想”自放归之日起至1月份，尽管在12月份后皮质醇水平有所波动，但整个趋势来看皮质醇水平一直处于相对稳定状态。因此