小鼠胸腺及其对异种抗原细胞的应答

小鼠胸腺及其对异种抗原细胞的应答

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1、类号:Q344密级:单位代码:10422学号:201111630⑧∥菇办誊、、露?。∥■月、/,守硕士学位论文论文题目:小鼠胸腺及其对异种抗原细胞的应答Micethymusanditsresponsetoheterologousantigencells作者姓名奎明耍学院名称生金料堂堂院专业名称发直生物堂指导教师白增亮教授合作导师2014年04月13日

2、IUlIIIIIIIIIIIIIIIlY2594370原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,

3、本论文不包含任何其它个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:壅望日垂日期:论文作者签名:釜坚强堑日期:关于学位论文使用授权的声明本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名:虹导师签名:亟批日期:2Q!丝‘

4、:刍山东大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..III符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..XII前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..1第—部分小鼠胸腺内注射及注射对小鼠胸腺造成的组织病理变化分析⋯..101.前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.102.实验材料与仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.112.1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.112.2主要试剂与其配置⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..122.3实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯

5、..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.133.实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..143.1小鼠胸腺发育情况分析⋯⋯⋯⋯⋯.⋯.⋯⋯⋯.⋯⋯⋯.⋯143.2细胞培养与DII标记⋯⋯........⋯.⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯..153.3小鼠胸腺内注射方法的简化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯....⋯⋯..163.4注射效率评估⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..173.5小鼠损伤程度的评估⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯183.6组织学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯..184.实验结果....⋯..⋯................

6、.⋯.........⋯....⋯⋯..205.讨论..⋯⋯⋯⋯..⋯⋯......⋯⋯⋯.......⋯....⋯⋯⋯25第二部分小鼠胸腺对异种抗原细胞的应答⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..27..........27山东大学硕士学位论文2.实验材料与仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯,⋯⋯⋯⋯.282.i实验材料⋯⋯..⋯⋯⋯⋯,⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯282.2主要试剂及其配制⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯282.3实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯293.实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯...30

7、3.1肿瘤细胞培养与DII标记⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯303.2小鼠胸腺内注射人肝癌细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯..303.3小鼠胸腺组织称重及胸腺细胞绝对值计数⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303.4组织病理学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.313.5FCM分析胸腺内各类细胞亚群比例变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..315.讨论⋯⋯.⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42论文总结与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..52山

8、东大学硕士学位论文研究背景与目的胸腺是哺乳动物的中枢免疫器官,是T细胞分化发育和成熟的场所,胸腺为T细胞发育提供了一个缜密而复杂的微环境,有序的调控T细胞的发育成熟和迁移。胸腺基质细胞、可溶性分子以及细胞外基质共同构成T细胞发育的胸腺微环境。胸腺基质细胞间相互连接成网状结构,不仅起网状支架作用,而且由于这些细胞表面携带大量表面分子、并可以分泌多种胸腺激素和细胞因子,从而为胸腺细胞的发育和成熟提供合适的微环境。T细胞在胸腺内经历TCR重排,阳性选择和阴性选择等发育过程最终发育为成熟的T淋巴细胞并迁移到外周免疫器官。根据传统

9、的诱导性中枢耐受的理论机制,如果T细胞发育过程中在胸腺内接触到异基因的抗原,则会被诱导出对该异基因外周移植物的耐受,同时,血一胸腺屏障使血液中的大分子物质包括外来抗原不能进入胸腺,所以胸腺内注射异基因抗原可以躲过免疫监视,诱导出对异基因抗原耐受的T细胞。为了探索异种抗原细胞在机体内的生物学特性及机体产生的免疫耐受和免

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