根结线虫的种类鉴定与分子鉴定技术的探究

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1、万方数据QingdaoAgriculturalUniversityTheThesisofProfessionalMasterIdemificationofRoot．．knotNematodesandDevelopmemofPCRAssaysforIdentificationGraduatewi吐1ProfessionalMasterDegree：WangLeileiMentor：ZhaoHonghaiTypeofPro．fessionalDegree：MasterofAgriculturalExtensionAcademicfield：PlantPr

2、otection删万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生虢豇毳时间：如．伊钿沏日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、

3、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生虢翰厄新签％惺形时间：洳，炉∥月瑚时间：知膨年石月幻日万方数据青岛农业大学硕士专业学位论文摘要根结线虫的种类鉴定与分子鉴定技术的探究摘要根结线虫(Meloidogynespp．)是专性内寄生线虫，在世界上分布普遍，寄主范围非常广泛，是对农业生产危害最大的植物病原线虫之一。山东省属暖温带季风气候类型，降水集中，雨热同季，根结线虫能够很好的生存和繁殖。本研究对山东省不同地区、不同寄主的根结线虫和外省部分地区的烟草根结线虫

4、进行了标样的采集、形态学鉴定和分子鉴定，探究了北方根结线虫和南方根结线虫的PCR快速鉴定和检测方法等。主要研究结果如下：对在山东省采集到的16份大姜土样进行线虫分离，共得到6个大姜癞皮病病原群体的标样。通过对这6个根结线虫群体进行形态学鉴定、rDNA-ITS区序列分析、mtDNA-PCR扩增分析，确定引起这6份大姜癞皮病标样的病原为南方根结线虫(Mincognita)。通过对冬季大姜癞皮病病土的采集、分离、恒温(27"C)处理，初步确定大姜癞皮病病原的越冬态是卵。本实验室在山东省胶州市首次发现紫叶小檗的根结线虫病，并采集了样品和对病原进行了初步鉴定。

5、由形态学鉴定、ITS区序列分析和mtDNA-PCR的扩增结果分析得到：引起紫叶小檗根结线虫痛的病原为北方根结线虫(Mhapla)。目前，尚未见到北方根结线虫侵染紫叶小檗的报道，紫叶小檗是北方根结线虫的新寄主。随着烟草种植面积的增加，多数烟田的连作，烟草品种的变化以及耕作制度变化，烟草根结线虫的危害越来越严重。本研究对山东省和其他几个省份的14个烟草根结线虫群体进行了鉴定，鉴定结果为13个根结线虫群体为南方根结线虫，1个根结线虫群体为北方根结线虫。另外，对来自山东省其他6种根结线虫寄主上的7个根结线虫群体进行了鉴定，6个根结线虫群体为南方根结线虫，1个

6、根结线虫群体为北方根结线虫。本研究通过从GenBank中筛选北方根结线虫和南方根结线虫的特异性序列，设计了北方根结线虫和南方根结线虫的特异性引物，并对其进行验证；其中南方根结线虫的特异性引物不能准确的鉴定该物种，而北方根结线虫的特异性引物能够准确快速的鉴定北方根结线虫。因此，本研究确定了北方根结线虫的特异性引物一对(MhPPF／R)。关键词：根结线虫；种类鉴定；新寄主；特异性引物万方数据青岛农业大学硕士专业学位论文AbstractIdentillicationofRoot．knotNematodesandDevelopmentofPCRAssaysf

7、orIdentificationAbstractRoot-knotnematodes(Mefoidogynespp．)areobligateendoparasites．nleyarewidelydistributedthroughouttheworldandhaveawiderangeofhosts，causingconsiderabledamagetoanumberofcrops．Shandongpmvince，beingofawarmtemperatemonsoonclimatetype，isasuitableareaforroot-knotne

8、matode’Soccu．,'Tence．Inthisstudy,morphologicalandmolec