不同物种来源花色苷对a亚群禽白血病病毒感染的df-1细胞生物活性的影响

《不同物种来源花色苷对a亚群禽白血病病毒感染的df-1细胞生物活性的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、山东农业大学硕士学位论文不同物种来源花色苷对A亚群禽白血病病毒感染的DF--1细胞生物活性的影响姓名：盖丽丽申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：姜世金20120613山东农业大学硕十学位论文中文摘要禽白血病(Avianleukosis，AL)是指由反转录病毒科中禽反转录病毒属的成员禽白血病俩瘤病毒群病毒(ALV瓜SV)引起鸡的各种可传播的良性和恶性肿瘤，是由禽白血病病毒和禽肉瘤病病毒群中的病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称。该病对鸡能引起许多种具有传染性的良性和恶性肿瘤。根据临床症状可分为淋巴细胞性白血病、成红细胞性

2、白血病、成髓细胞性白血病、骨髓细胞瘤病、结缔组织性肿瘤、骨硬化病等。第一部分禽白血病病毒Real．time荧光定量PCR方法的建立建立ALV以的PCR检测方法，分别扩增出大小为743bp的禽自血病特异性P27抗原片段和529bp的AL、，．A特异性片段，P27片段与ALv．A亚群毒株ALV二RSA(M37980．1)、Myeloblastosis．associatedvirus(L10923．1)的相应核苷酸序列的同源性分别达97％和96．6％，ALv．A特异性目的基因与ALv-A亚群毒株ALV-RSA(M37980．1)、

3、Myeloblastosis．associatedvirus(L10923．1)的相应核苷酸序列的同源性分别达93．6％和96．8％。同时对此病毒大量繁殖，由于ALV-A病毒在细胞上无明显CPE，对其采用real．time实时荧光定量法进行定量检测，本研究根据禽白血病病毒禽白血病A亚群env基因序列特异的特点，在其gp85内设计了1对引物，应用Taqman探针法realtime实时定量检测禽白血病病毒的方法，测得样品量大约为104‘67模板拷lYl．／1．tl，对后续试验应用此ALV以病毒提供了基本数据。．第二部分不同物种来

4、源花色苷对DF．1细胞的作用本部分主要探索不同物种来源的花色苷对DF．1细胞的影响，初步摸索各种花色苷作用在DF．1细胞上的最适终浓度。通过直接观察法探索了十种不同物种来源花色苷对DF．1细胞贴壁，生长的影响，结果发现不同浓度的蓝莓花色苷、心里美萝卜花色苷、紫甘蓝花色苷、紫甘薯花色苷、接骨木花色苷和紫玉米花色苷对细胞贴壁和生长有明显促进作用，同时能测得其对贴壁的最适终浓度；而黑豆皮花色苷、黑加仑花色苷、红豆越橘花色苷和花楸花色苷不能使DF．1细胞贴壁和生长而导致细胞死亡。应用MTT法探索上述六种对促进细胞贴壁和生长效果好的的

5、花色苷，结果表明其对细胞活性具有明显的正向效应。第三部分应用MTT法检测不同物种来源花色苷对感染禽白血病病毒细胞的生物活性分别在ALA．V感染DF．1细胞的同时(预防)或在ALv-A接种DF．1细胞一小时后T一不同物种来源花色营对禽白血病病毒生物活性的影响(治疗)，将六种对DF．1细胞生长具有促进作用的六种花色苷(蓝莓花色苷、心里美萝b花色苷、紫甘蓝花色苷、紫甘薯花色苷、接骨木花色苷和紫玉米花色苷)以三个不同浓度(5099／mL．75pg／mL和100pg／mL)加到DF-l细胞中，研究不同花色苷对感染ALV细胞的生物活性的

6、影响。结果表明，无论是治疗板还是预防板，不同浓度的心里美萝b花色苷均显著提高了DF．1细胞的活性，而其他五种花色苷则作用效果不明显。第四部分感染ALv．A细胞的NF．v．B活性检测本研究在DF．1细胞接入ALv-A后不同时间段(12h，24h和48h)提取核蛋白，检测NF．v,B是否有相应的变化。结果表明，与对照细胞相比，试验组在12h和24h时核蛋白的含量明显升高，但48h时无明显变化，进行ELISA检测时发现三个时间点对照组与试验组的NF．1cB活性均差异不显著。关键词：A亚群禽白血病病毒；花色苷；NF．1CB；DF一1

7、细胞；MTT；细胞活性山东农业大学硕+学位论文TheimpactofdifferentspeciessourcesofanthocyaninsonthebiologicalactivityofDF-1celllinewhichinfected_●’‘●·byavianieukemiavirussubgroupAAbstractAvianleukemia(AvianleukosisAL)referstoavarietyoftransmissiblebenignandmalignanttumorsinthechickensaro

8、usedbythemembersofthegenusoftheRetrovirusBranchofavianretrovirusavianleukosis／sarcomavirusgroupofviruses(ALV／RSV)．Accordingtoclinicalsymptoms，the