甲肿消对甲状腺细胞凋亡及甲状腺激素合成相关蛋白的影响

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1、中国中医科学院硕士学位论文甲肿消对甲状腺细胞凋亡及甲状腺激素合成相关蛋白的影响姓名：高亚芹申请学位级别：硕士专业：中医内科学指导教师：刘喜明20120516甲肿消治疗甲状腺功能亢进症的机理研究中文摘要甲状腺功能亢进症是由甲状腺激素分泌过多所致的一种内分泌疾病，其中最常见的是弥漫性甲状腺肿伴甲亢(GD)，约占全部甲亢病的90％⋯。GD的病因和发病机理尚不明了，但目前一般均认为是一种器官特异的自身免疫性疾病，有体液免疫与细胞免疫参与发病，是多基因、多因素的遗传性疾病乜1本实验通过研究化痰散结中药甲肿消对甲状腺细胞凋亡、甲状腺过氧化物酶(T

2、PO)活性、甲状腺激素合成相关蛋白TPO、甲状腺球蛋白(TG)、钠碘转运体(NIS)基因表达及蛋白表达的影响，阐述甲肿消作用于甲状腺细胞的机理，从而为甲肿消治疗甲状腺功能亢进症提供理论依据。中医治疗甲状腺肿大有几千年的历史，化痰散结法为其基本治法。化痰散结中药分为含碘类和非含碘类两种，含碘类药物，如昆布、海藻等常用来治疗地方性甲状腺肿、甲状腺结节等单纯性甲状腺肿大；非含碘类中药，如夏枯草、醋山甲、浙贝母、白僵蚕等可以用来治疗自身免疫性甲状腺疾病，但是，临床对此报道较少。甲肿消由多种非富碘化痰散结中药组成，是吾师刘喜明治疗甲状腺肿大的临

3、床效验方。刘主任带领的糖尿病研究室成功的完成了两次国家自然基金，研究甲肿消治疗甲状腺功能亢进症机制，充分证明了甲肿消治疗自身免疫性甲状腺疾病的效果。甲状腺肿大是由于各种原因导致的甲状腺细胞动力学异常，细胞增殖与凋亡平衡失调，增殖>凋亡鹏。51。近年来，许多研究从甲状腺细胞凋亡角度研究化痰散结中药疗效和作用机制，都一致认为富碘化痰散结中药有促进甲状腺细胞凋亡的作用，且有量效一时效关系叩、71但对非富碘化痰散结中药与凋亡的关系研究较少。甲状腺滤泡细胞在合成和分泌甲状腺激素的过程中，以下三种蛋白执行重要功能。钠碘转运体是一种糖化膜蛋白，位于

4、甲状腺滤泡细胞的基底膜外侧，负责从血液向细胞内转运碘，是甲状腺激素合成和释放的前提条件随、91。甲状腺球蛋白是碘有机化的部位所在，碘与TG上的酪氨酸残基结合形成碘化酪氨酸。甲状腺过氧化物酶的作用是催化碘的有机化和碘化酪氨酸的耦联，是甲状腺激素合成的关键酶。本实验一方面通过研究甲肿消对甲状腺细胞凋亡的影响，阐述甲肿消治疗甲状腺肿大的机理；另一方面通过研究甲肿消对甲状腺激素合成相关基因及蛋白表达的影响，揭示甲肿消治疗甲状腺功能亢进症的机理。实验按照甲肿消剂量不同，将甲状腺细胞分为0、0．2、0．4、0．8、1．6mg／ml组，甲状腺细胞培

5、养24h后观察细胞凋亡形态、计算细胞凋亡率，改良愈创木酚法检测TPO中国中医科学院2009级硕士研究生学位论文活性，反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测甲肿消对TG、TPO、NIS基因转录的影响，westernblot检测甲肿消对TG、TPO、NIS蛋白表达的影响。结果发现：甲肿消能促进甲状腺细胞凋亡，抑制TPO活性，抑制TG、TPO基因转录及蛋白表达，但对NIS基因转录及蛋白表达无影响。通过实验结果分析：甲肿消治疗甲亢病的机理可能是①，通过促进细胞凋亡抑制甲状腺肿大；②，通过抑制TPO活性，TG、TPO基因表达及蛋白表达，影响甲

6、状腺激素合成。关键词：化痰散结：甲肿消：甲状腺过氧化物酶：甲状腺球蛋白：钠碘转运体：细胞凋亡甲肿消治疗甲状腺功能亢进症的机理研究ABSTRACTHyperthyroidismisadiseasewhichcausedbyexcessivesecretionofthyroidhormone．Graves’diseaseisthemostcommondiseaseinhyperthyroidism，whichalmostaccountforabout90％ofhyperthyroidism．Itisnotfigureoutyetthere

7、asonandpathogenesisofHyperthyroidism，butitisusuallysupposedtobeaorganspecificautoimmunedisease，cellularimmunityandhumoralimmunityareinvolvedinthepathogenesis，ispolygenic，mulfifactorialgeneticdisease．ThroughthestudyoftraditionalChinesemedicineonremovingphlegmandresovling

8、massapoptosis，thyroidperoxidaseactivityinthyroidhormonesynthesisrelatedprotein，TG，TPO，NISgeneexpressionandprot