液相色谱测甲醇含量

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1、实验二：液相色谱仪的硬件与软件操作一、实验目的1.了解高效液相色谱仪的基本结构及仪器掌握分离分析的基本原理；2.学习掌握液相色谱仪的硬件操作及软件操作。二、实验原理高效液相色谱仪为岛津液相色谱仪由SPD-20A检测器、LC-20AT泵（A、B泵）、微量进样器（50μL）、AtlantisC18色谱柱、CBM系统控制器等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程。各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，

2、通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到CBM系统控制器，数据以图谱形式打印出来。三、实验仪器与试剂仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器（50μL），AtlantisC18色谱柱试剂：甲苯标准液（1000ppm）、甲醇（AR），超纯水四、实验步骤：1.准备每次进样之前都应该用甲醇洗针15—20次1.1流动相前处理准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min（这里用的是流动相是甲醇（AR）(B)和超纯水(A)，分别用有机相系和水相系的0.45µm滤膜过滤）。1.2样品的配置配制样品浓度为1000ppm（也可在平衡系统时配制

3、）。甲苯标准液（1000ppm）的配置：用移液管分别量取1mL的甲苯用甲醇(AR)定容在10mL的容量瓶中得到甲苯标准液（105ppm）。然后用移液管量取1mL刚定容的甲苯标液（105ppm）再用甲醇（AR）定容在10mL的容量瓶中得到甲苯标准液（104ppm）。并用移液管量取1mL刚定容的甲苯标准液（104ppm）再用甲醇（AR）稀释定容在10mL的容量瓶中，这样就配制成甲苯标准液（1000ppm）。1.3根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱和定量环。（如图，注意箭头方向向上，切勿装反了柱子，损坏色谱柱。）1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。2.高效液相色谱操作流程2.

4、1开机接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器。待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站（即电脑桌面上的CS-LightRealTimeAnalysis）。2.2参数设定2.2.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键接着按[Enter]键，用数字键输入所需波长值254nm，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。,w42.2.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线流速一般不超过1ml/min，流速设置过大，柱压加大，影响柱效）。按[Enter]键确认。按[CE]键退出。2.2.3流动相

5、比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数。本次实验设置流动相比例：水（A）20%、甲醇（B）80%。按[Enter]键确认。按[CE]键退出。3.更换流动相并排气泡将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中，两个泵上部中间的黑色旋钮(排液阀)逆时针旋转90~180度，分别按A、B泵的[purge]键对泵进行冲泵，脱去流动相中的气泡。屏幕显示为“Purgeingline”,当冲泵完成后则恢复初始屏幕，各泵各冲2次；将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀.4.平衡系统按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开"在线色谱工作站"软件，输入实验信息并设定

6、各项方法参数后，按下"数据收集"页的[查看基线]按钮。4.1等度洗脱方式;按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。检查各管路连接处是否漏液（可用滤纸擦拭检查），如漏液(压力值迅速下降)应予以排除。观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，则从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。。观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV

7、时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。5.进样5.1在桌面上找到CS-LightRealTimeAnalysis，双击图标。输入用户名Admin，点击确定。5.2进样前在CS-LightRealTimeAnalysis中:点击“单次分析”，接着点击“样品记录”，在样品记录名称中输入所要检测得样品名称，然后点击“数据文件”选择该样品储存在哪里，最后在“数据储存的文件夹”后面输入该样品名称，点击确定