纤维蛋白溶解系统检测

《纤维蛋白溶解系统检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、纤维蛋白溶解系统检测高玉凤刘艳芝薄晶群(黑龙江省农垦总局牡丹江分局中心医院157000)【中图分类号1R446【文献标识码】A【文章编号11672-5085(2011)01-0191-03【摘要】纤维蛋白溶解系统(简称纤溶系统)一方面与血液凝固系统共同协调，使体内血凝块或血栓溶解，维持血循环的畅通；另一方面可使局部炎症灶得到清除，促进伤口愈合•使腺体、导管内的纤维蛋白块及时溶解.以保证各管道的畅通。【关键词】纤溶系统检测方法评价影响因素(一)纤溶酶原测定纤溶酶原(plasminogen,PLG)测定有活性和定量测定，活性测定多采用发

2、色底物法;定量测定可采用ELISA法或其他免疫学方法。此处介绍发色底物法原理。1.原理首先将链激酶(纤溶酶原激活剂)加入待检血浆，使纤溶酶原活化成纤溶酶。然后再加入显色底物。纤溶酶可以水解底物释放出显色剂PNA,PNA的量与血浆中纤溶酶原的量成正比。2.试剂与方法与上述发色底物法ATJII类似，此处不再做介绍，或可参照有关的操作说明书。(二)血浆鱼精蛋白副凝固试验1.原理在凝血酶的作用下，纤维蛋白原释放出FPA、FPB后转变为纤维蛋白单体(FM),进一步牛成纤维蛋白。纤维蛋白在纤溶酶的作用下产生纤维蛋白降解产物(FDP),FM与FD

3、P的碎片可形成可溶性复合物，鱼精蛋白可使该复合物中的FM游离，FM再自行聚合呈肉眼可见的纤维状、胶状或胶冻状，木试验阳性可反映FDP尤其是碎片X的存在。2.材料(1)10g/L鱼精蛋白溶液(pH6.5),分装后置・20°C冰箱保存。(2)阳性对照血浆。(1)37°C水浴箱，离心机，试管等。3标本要求109mmol/L枸椽酸钠9抗凝血浆。4操作⑴取经枸椽酸钠抗凝⑴9)的乏血小板血浆0.5ml于试管中，置37°C水浴分钟。(2)加10g/L鱼精蛋白溶液0.05ml混匀，置37°C15分钟，、立即观察结果。5•注意事项(1)抽血不顺利、抗

4、凝不均匀、导管内抽血、标本放入冰箱或标本反复冻溶、未能立即观察结果、贫血、抗凝剂不足等均会导致假阳性结果。⑵严格控制水浴箱的温度和放置吋间，不然会造成假阳性或假阴性，如水浴温度未达37°C,重新加热至37°C吋会造成假阴性。6.结果判断健康人为阴性。(1)阴性：血浆透明、清晰、无不溶解产物产生。(2)弱阳性:细颗粒沉淀。(3)阳性：粗颗粒沉淀。(4)强阳性：纤维蛋白丝、纤维蛋白网或胶冻形成。(一)纤维蛋白降解产物(FDP)测定FDP各个碎片仍具有与纤维蛋白原及纤维蛋白相同的抗原决定簇，故有相同的抗原性，一般以人纤维蛋白原免疫家兔制备

5、抗血清，利用抗血清通过各种免疫学方法检测FDP水平，常用的有胶乳颗粒凝集试验、ELISA试验及其他免疫学方法，此处介绍胶乳凝集法。1•原理胶乳凝集法。血清纤维蛋白(原)降解产物(6brindegradationproducts,FDP)检测是向被检血浆中加入FDP抗体包被的胶乳颗粒悬液，当血清中FDP的浓度等于或超过5mg/L时，便与胶乳颗粒上的抗体结合，则胶乳颗粒发生凝集。根据被检血清的稀释度可计算出血清FDP的含量。2.试剂组成胶乳试剂、缓冲液、阳性对照、阴性对照、胶乳反应板。3操作(1)取被检者静脉血，以1570g离心5分钟，

6、分离血清。(2)用微量加样器吸取20μl胶乳试剂，置于胶乳反应板的圆圈内，再加入20μl被检血清，用玻棒搅匀，轻轻摇动3~5分钟。(3)在较强的光线下观察结果，出现明显均匀的凝集颗粒者为阳性(FDP含量≥5mg/L),无凝集颗粒者为阴性(FDP含量<5mg/L)o(4)如果阳性,进一步将被血清用缓冲液作I：2、1：4、1：8、I：16等倍比稀释，分别按上法进行测定，以发生凝集反应最高稀释度作为反应终点。(5)结果计算:本法最大敏感度为5mg/L,如被检血清最高稀释倍数为1：16,则被检血清中FDP的含量为5&

7、times;16=80mg/Lo4.注意事项(1)实验所用试剂盒应置2〜8°C保存，切勿冻结，测定前从冰箱中取出，与室温平衡，用前轻轻摇匀。(2)胶乳反应板应保持清洁干燥。(3)测定温度应高于20%,低温环境应延长1〜2分钟观察结果。5.参考值血清FDP含量&e;5mg/L。(一)D■二聚体测定目前，可用于D■二聚体测定的方法很多，如胶乳凝集法、免疫渗滤法、自身红细胞凝集试验、EuSA试验、免疫比浊法(胶乳增强型免疫比浊法)等，目前已有许多品牌的全自动血凝仪均可以进行D・二聚体测定。下面介绍临床最常用的两个实验方法的工作原理。1原理

8、⑴胶乳凝集法：D・二聚体(D-dimer,D・D)是交联纤维蛋H降解产物之一，为继发性纤溶的特有代谢产物。被检血浆中加入标记D■二聚体单抗的胶乳颗粒悬液，如果血浆中D・二聚体含量>0.5mg/L时，便与胶乳颗粒上的抗体结合，胶乳