羊膜移植联合bfgf促进犬角膜上皮损伤愈合的效果研究

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1、华中农业大学硕士学位论文羊膜移植联合bFGF促进犬角膜上皮损伤愈合的效果研究姓名：吴汉平申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：丁明星201206羊膜移植联合bFGF促进犬角膜上皮损伤愈合的效果研究摘要在常见的宠物眼科疾病中，角膜损伤发病率较高，治疗不当会导致失明。选用犬急性期角膜碱烧伤作为实验模型。羊膜移植术是近来眼科研究的热点，羊膜作为一种生物材料用于眼科疾病的治疗，能够促进细胞增殖、减轻炎症、减少角膜新生血管(CNV)、防止纤维化形成瘢痕，从而能达到重建眼表的效果。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种具有多重生

2、物学功能的细胞生长因子，本实验室已有的研究成果表明，适宜浓度的bFGF点眼能够促进细胞增殖，加快角膜上皮层损伤愈合速度。对此，采用bFGF联合羊膜移植术治疗急性角膜碱烧伤，了解其促上皮层愈合的效率。在体外观察羊膜组织匀浆液对多形核中性粒细胞(PMN)趋化性迁移的影响，了解羊膜抑制角膜炎症的作用。抽提健康犬外周血PMN，使用不同稀释度羊膜均浆组织液孵育，在Transwell体系中以白细胞介素．8作为趋化剂进行趋化迁移实验，检测经羊膜均浆组织液处理后PMN的趋化性的变化，以验证羊膜是否通过抑制PMN迁移而达到抗炎效果。建立犬碱烧

3、伤模型，将含有bFGF制成10ng／mL滴眼液与羊膜移植联合使用。24只杂交犬随即分为4组，即空白对照组、结膜瓣覆盖组、羊膜移植组和bFGF联合羊膜移植组。0d实施手术，术后观察角膜浑浊度和CNV，并对其进行评分，10d动物安乐死，取角膜进行病理学观察。实验结果表明，术后10d，羊膜移植组和联合组在炎症反应、组织修复及抑制新生血管方面优于空白对照组和结膜瓣覆盖对照组。9d、10d时联合组角膜浑浊度显著优于羊膜移植组(P--0．021；0．032)，在CNV的出现时间上，联合组(7d)较羊膜移植组(4d)晚。用3种浓度羊膜匀浆

4、提取液孵育外周血抽提的PMN，其向趋化因子的迁移效率均降低，其中高、中浓度羊膜均浆提取液抑制其趋化能力显著(P=0．022)。在犬角膜碱烧伤治疗方案中，bFGF联合羊膜移植术治疗较单纯羊膜移植治疗具有更好的疗效。羊膜可以通过降低PMN趋化性抑制其在碱烧伤早期浸润角膜组织，从而起到抗炎效果。关键词：碱烧伤；羊膜移植；碱性成纤维细胞生长因子：多形核中性粒细胞AbstractInthecommonophthalmicdiseaseofpets，theincidenceofcornealdamagewhichresuItsinbli

5、ndwithmalpracticeishigherthanotherdiseases．Inrecentyears，amnioticmembranetransplantationishotspotinophthalmicresearch．Asabiologicalmaterialusingfortreatingophthalmicdisease，amnioticmembraneCallreconstructocularsurfacebypromotingcellproliferation，preventingscarringa

6、fterfibrosis，andreducingiIm孤IllIlationandcornealneovascularization．ProperconcentrationofbFGFwhichhasmultiplebiologicalfunctionscanpromotecellproliferationandspeedinghealingthesurfacelayerofthecorneainourpreviousstudies．SowetreatedacutecornealalkalibumbyusingbFGFcom

7、binedwithamnioticmembranetransplantationtoknowthehealingrateofcornealepithelium．Inordertoknowtheeffectofamnioticmembraneoncomealinflammation，weresearchtheimpactofamnioticmembranehomogenateonthechemotaxismigrationofneutrophils．Neutrophilswereseparatedfromperipheralb

8、loodcellsofhealthdog，andnestedwithamnioticmembranehomogenatewithdifferentdilutedconcentrations．ThetranswellsystemWasusedtoresearchthechemotaxisof