猪体外成熟卵母细胞孤雌激活和胚胎培养的研究

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1、·实验酣奔·回蟹蛔量固20l0年第j期总第262期第3l卷@黪移国黪鲼刘瑜琨，董振国27刘晓宁，张丽欣(1．穆棱市马桥河镇畜牧站，黑龙江穆棱157517；2．黑龙江省博瑞遗传有限公司，黑龙江哈尔滨150069：3．东北农业大学动物科学技术学院，黑龙江哈尔滨150030)【摘要】以猪体外成熟卵母细胞为实验材料，研究了不同激活方法、激活时间以及是否添加滋养层细胞的条件对猪成熟卵母细胞体外培养的影响。结果表明，Ionomycin+6．DAMP+CB法卵裂率高，且差异显著；使用6．DMAP激活3h的卵裂率要低于4h和5h组，且差异显著；在卵裂率、8细胞率和囊胚率上

2、，添加滋养层细胞组与未添加滋养层细胞组之间无显著差异，但添加vero细胞后效果略好。【关键词】猪；卵母细胞；孤雌激活；胚胎培养【中图分类号1s814．8【文献标识码1A【文章编号】1672—2078(2010)01—0008—03TheRelatedResearchofSowMaturedOocytesParthenogeneticActivationinVitroLIUYu-kun，DONGZhen—guo，LIUXiao—ning2，ZHANGLi—xins(1．MulingCityMaqiaoRiverCountryAnimalHusbandrySt

3、ation．MulingHeilongjiang157517；2．HeilongjiangBomigeneticCo．Ltd．HarbinHeilongjiang150069；3．CollegeofAnimalScienceandTechnology,NortheastAgriculturalUni-versity，HarbinHeilongjiang150030)[Abstract]TheSOWmaturedoocytesinvitroastheexpefimen~lmaterialstostudythediferentactivationmethods

4、，theac—tivationtime，andwhethertotheefectsofaddingconditionsonthetrophoblastcellsinSOWoocytesmaturedinvitro．Theresultsshowthat，themethodoflonomycin+6一DAMP+CBraisethecleavagerate．andthesignificantdiference；3husing6"DMAPtoactivatetheoocytes，thecleavagerateislowerthan4h，and5hgroups，an

5、dthesignificantdiference．Duringthecleavagerate，8-cellrateandblastocystrate，addtrophoblastcellgroupanddidnothasnosignificantdiferencebetweengroups，buttheefectofaddingverocellswassli曲nybeaer．[Keywords]pig；oocyte；parthenogeneticactivation；embryoculture猪的克隆和转基因生产为胚胎工程、品种改良1材料与方法以及医学组织

6、工程都提供了新的思路，在诸如异体1．1卵巢的采集器官移植和生产一些特定的蛋白质等方面具有广在屠宰场将被屠宰的猪卵巢立即取下，用阔的前景，而猪的克隆和转基因生产等都需要大量生理盐水冲洗干净，保存于25～35℃含有青霉素具有发育潜力的早期胚胎。因此，需要找到一种理(100IU／mL)和链霉素(100IU／mL)的生理盐水的保想的猪成熟卵母细胞体外培养的方法。对猪成熟温瓶中，在3h内运回实验室。预热的生理盐水洗卵母细胞体外培养的影响因素有许多，如激活方涤卵巢至无血水为止，选择排卵点多且直径在3～式、激活时间以及培养液种类等。本实验从20096nllTl卵泡的卵巢

7、，带进无菌实验室。年初，利用半年的时间主要研究了激活方法、激活时间以及各类胚胎培养液对猪成熟卵母细胞体外1．2卵母细胞的采集和成熟培养培养的影响。使用配有12号针头的10mL注射器从3～6nlm卵泡中抽吸卵母细胞，采卵液为TCM一199(Hank’s)，成熟液为自配成熟液，自配成熟液成份为TCM-199(Earle’s)液0．1％，PVA3．05mM，D—glucose0．91mMsodium，pyruvate75mg／mL，penicillin50mg／mL，收稿日期：2009年12月8日streptomycin50mg／mL，在每次使用之前加入药品：·

8、·L==二■己i幽·甄验硼夯·2010年第l期总第262期第31卷