特发性炎症性肌病肌组织中腺苷及腺苷受体的分析

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1、山东大学博士学位论文特发性炎症性肌病肌组织中腺苷及腺苷受体的分析姓名：遇晓申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：焉传祝2012-11-15山东大学博士学位论文特发性炎症性肌病肌组织中腺苷及腺苷受体的分析博士研究生：遇晓专业：神经病学博士生导师：焉传祝教授论文摘要研究背景和目的特发性炎症性肌病(IIMs)是一组非感染性炎症性肌病，以骨骼肌中炎症细胞浸润及肌纤维萎缩、坏死为主要病理特征，其原因和发生机制不清。以多发性肌炎(PM)、皮肌炎(DM)和包涵体肌炎(I酬)3个亚型最为多见。腺苷是细胞自分泌或旁分泌途径中的信号分子，在维持内环境稳定

2、方面起重要作用。腺苷可以抑制氧化爆发和肿瘤坏死因子Q等炎症因子，在调节免疫和炎症反应方面起重要作用，在败血症患者和克隆恩病动物模型中均发现细胞外腺苷水平升高。腺苷主要通过与其受体结合起作用，腺苷受体检测是判断腺苷发挥抗炎和免疫调节作用的关键环节。腺苷受体(AR)分四型：A。AR、A趴AR、A4R、A擅R，均为G蛋白偶联的七跨膜受体。LyngeJ等采用免疫组织化学法和western-blotting法检测人类骨骼肌腺苷受体A。AR、A舶R和A2BAR的分布，结果观察到骨骼肌仅表达A孙AR和A珏AR，肌纤维膜和胞浆中均有表达，而A，AR不表达

3、。1993年SajjadiFG等采用RT—PCR技术对A小R进行克隆和序列分析，发现A扭R在人的骨骼肌组织几乎不表达。细胞外腺苷的来源：一方面，腺苷单磷酸(AMP)在细胞外的5’一核苷酸酶(CD，。)作用下脱磷酸产生腺苷。AMP来自于细胞外的腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)在三磷酸核苷脱磷酸酶(NTPDase)等作用下脱磷酸生成。细胞外的NTPDases有多种，C％是细胞外主要的腺苷酸脱磷酸酶，CD骝L。也是一种常见的细胞外的NTPDase。另一方面，炎性细胞释放腺苷，也是细胞外腺苷的重要来源。因此，我们检测A孙AR、A小R和A

4、3AR在人骨骼肌纤维的表达，IIMs患者肌肉组织腺苷受体表达以及细胞外腺苷生成相关酶表达的变化，探讨腺苷途山东大学博士学位论文径作为肌肉组织的自身保护机制在炎症性肌病状态下的改变，为IIMs的治疗探索新的方向。研究对象与方法选取临床有肌无力症状但肌活检病理无神经肌肉损害表现者17例，四肢来源的骨骼肌14例，竖脊肌3例检测AR表达。收集30例IIMs患者骨骼肌活检组织标本，其中DM患者15例、PM患者11例、IBM患者4例，肌活检大致正常者14例(活检部位均为四肢骨骼肌)作为正常对照，FSHD患者5例作为炎症特异性对照。对肌活检组织行wes

5、tern印迹分析、免疫组织化学染色，比较IIMs患者A孙AR、A：BAR、A擅R以及细胞外腺苷生成相关酶CD，。、CD。。、CD∞L。与正常对照的差别。采用SPSSl7．0统计软件进行分析，计量数据以均数±标准差(；±曲表示，统计学分析采用student芒检验；分类资料进行x2检验，频数

6、无明显着色，间质和血管无明显着色；A：小R抗体免疫荧光染色阳性主要见于1型肌纤维胞浆；A出R抗体免疫荧光染色阳性主要见于2型肌纤维胞浆和血管平滑肌，2型肌纤维胞浆荧光强度+，血管平滑肌荧光强度+++，肌纤维膜无明显着色。3．Western印迹分析显示3例竖脊肌AnAR、A。dR、A。AR条带均较四肢骨骼肌的相应条带宽。4．IIMs患者非坏死纤维A。．AR、A。小R和AnR抗体免疫荧光染色较正常对照增强；westernblot分析A：。AR、A：嘏R条带灰度值较正常对照增加，A4R条带灰度值较正常对照无显著差别。部分坏死肌纤维A担R抗体免疫

7、荧光染色呈强荧光反应。5．细胞外腺苷生成相关酶CD，。抗体染色见于炎症部位的肌筋膜、肌内膜和部分形态正常肌纤维内膜，非炎症部位的肌间质中也有深染；CD。。和CD∞L．抗体染色在肌纤维无着色，CD∞阳性见于血管内皮细胞，CD∞L。阳性见于肌内末梢神经周围和肌梭内。山东大学博士学位论文结论1．微量肌肉组织western印迹分析证实人骨骼肌表达k、k和A。型腺苷受体。2．A舶R表达于肌纤维膜，A：小R主要表达于1型肌纤维胞浆，AnR表达于2型肌纤维胞浆和血管平滑肌。3．竖脊肌如、A拈和A3型腺苷受体表达量较四肢骨骼肌更高。4．western印迹

8、显示IIMs患者A烈AR、A。BAR表达增加，AAR表达不增加；而抗体免疫荧光染色显示IIMs患者非坏死肌纤维A雄R、A：毋R和A姐R表达均增加，可能与炎症损伤和糖皮质激素应用导致2型肌纤维数