人类原始生殖细胞的鉴定

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1、军医进修学院解放军总医院硕士学位论文人类原始生殖细胞的鉴定姓名：乔江丽申请学位级别：硕士专业：妇产科指导教师：赵恩锋；彭红梅2012-05-21军医进修学院硕士学位论文人类原始生殖细胞的鉴定中文摘要【背景和目的】人类原始生殖细胞(PrimordialGermCell，PGC)是z．0r,母细胞和精子的祖细胞，是人类生存及繁衍后代的重要细胞。PGCs起源于性腺外，经迁移到达生殖嵴与体细胞共同组成生殖腺；PGCs在性腺肉经增殖、凋亡、分化等一系列复杂的变化最终形成成熟的卵子和精子，而卵子又是妇女体内最珍贵的细胞，出生后在体内的数量是一定的，并随着年龄增长逐步消耗，不可再生。随着妇女平均生育

2、年龄的推迟，不孕患者日趋增多，认识PGCs的起源、迁移、增殖、分化等过程对生殖医学发展具有重要意义。本研究主要是用合适的方法制备完整的胚胎切片，根据文献报道人原始生殖细胞的形态、大小及其表面标志物，利用新鲜胚胎组织冰冻切片进行碱性磷酸酶染色，石蜡切片行免疫组化染色的方法初步鉴定早期胚胎人原始生殖细胞。为以后研究11PGCs的迁移、增殖、分化及最终的hPGCs培养等奠定郫出。【方法】经我院伦理委员会批准，征得孕妇同意，经签署知情同意书。收集胎龄约为21．35d药物流产胚胎。按孕妇末次月经目减去14d，并结合胚胎发育的外部特征计算胎龄。药流胚胎经多聚甲醛固定、石蜡包埋，进行HE染色，碱性磷

3、酸酶染色和相关抗原免疫组化染色等，免疫组化染色时以小鼠肾组织作为阳性对照，用PBS液代替一抗作为阴性对照，检测未分化多能干细胞标志物Oct．4的表达情况。【结果】1、借助解剖显微镜我们可以成功制备出比较完整的人类早孕期胚胎切片，胎芽头部、上下肢芽、心脏、脊柱和卵黄囊等主要结构显示清楚；2、冰冻新鲜胚胎组织切片碱性磷酸酶染色及石蜡切片碱性磷酸酶染色：在胚胎的后肠部位可见有碱性磷酸酶染色阳性、体积大而圆的细胞，初步鉴定为原始生殖细胞；3、新鲜胚胎石蜡切片免疫组化染色结果：34．35天大小人类胚胎尾部可见Oct-4阳性的细胞，较周围细胞形态大而圆。3军医进修学院硕士学位论文【结论】1、能够成

4、功制备出人类孕早期胚胎的完整切片；2、人类早期胚胎冰冻切片和新鲜胚胎石蜡切片的后肠部位有碱性磷酸酶染色阳性的细胞；3、人类早期新鲜胚胎石蜡切片尾部可见Oct．4阳性的细胞。Oct．4阳性细胞较其周围细胞形态大而圆，初步鉴定为原始生殖细胞。【关键词】原始生殖细胞，碱性磷酸酶染色，免疫组化法4军医进修学院硕士学位论文IdentificarlonofHumanPrimordialGermCellsAbstractIBackgroundand0bjectivelHumanprimordialgermcellsareprogenitorsofoocytesandsperms，andimporta

5、ntsourcesofhumansurvivalandregeneration．Theprimordialgermcellsoriginatefromtissuesoutofgonads，thenmigratetotheprimordialgenitalridges．Duringthispreriod，theyexperienceaseriesofchangessuchasproliferation，differentiation．Currentlymuchprogresseshavebeenmadeinavianandmouse，butforhumanprimordialgermce

6、lls，theirorigin，migration，proliferationanddifferentiationarestillobscure．ThisstudywillusewholeembyosofearlyabortustoinvestigatethemigrationpathwayofhumanPGCs，whichissignificantfortheinvestigationofearlydevelopmentofhumangermcellsandovaries．1MothedslWimtheapprovaloftheEthicsCommitteeofthePLAGener

7、alHospital，informedconsentsignedbytheoutpatientsofthedepartmentofObs&Gyn．freshabortuswerecollected．Calculationofgestationalagewasbasedoninformationaboutthelastmenstrualperiod，andmeasurementsofcrounrumpandfootlengths．Embryosw