碱蓬gst基因cdna的克隆与表达及碱蓬cdna过量表达文库转化拟南芥的研究

《碱蓬gst基因cdna的克隆与表达及碱蓬cdna过量表达文库转化拟南芥的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、山东师范大学硕士学位论文碱蓬GST基因cDNA的克隆与表达及碱蓬cDNA过量表达文库转化拟南芥的研究姓名：王丽萍申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：赵彦修2002.4.29Y，448471中文摘要}l'k胁迫包括细胞的渗适胁迫和离子1111迫，以及山这两种肋、迫](u)`"I:的次级胁迫即活性氧胁迫。细胞'I'积米的大虽活性氧能够异致蛋自质、膜脂、DNA及只它细胞组分的严重损伤。植物体内的抗乳化系统可以分为N促反应系统和III"i1i促反应系统，几中酶促反应系统主要包括超氧化物歧化i51i(SOD)、过牡化'-,(Itiit(CA

2、F)、补肤一i肤转移酶(GST)、谷)JAI}一月太过氧化物?%(GPOX).」亢坏1111A过权化物Iryig(APX)""oGSTh不仅能催化降解有毒的内源或异源代谢产物，降低这些物质分致的认化拟伤;fu川.ij时具有GPOX活性，能够直接洁除细胞内的活性较。石。:物GSTlihcDNA克1:j}x!i!从谷类作物，I'分离到，后Al也d一lI`1PI}.(I:大1、、、'.,铃A,.烟草、拟南芥中分离到。在烟草，}“己鉴定G,7'摧囚的过{:{农达分别有效的增强了J红ildl受fk胁迫和抗冷冻的能力。tk地碱蓬(Suaedasals

3、a)足一种可以在400mMNaC!的浓度卜}_常'-I:L}Ii'JIlilJ}fH水植物。从盐地碱蓬幼苗的cDNA文库的1000余个ESTs(ExpressedSequenceTags)'-I'获得一个约0.6kb的EST，同源性分析表明该EST与已报告的大;>'.(Glycinemax)GSTcDNA的同源性达55%。上述EST经通川载体引物xxi句测序获得其个氏cDNAIJ'列，GenBank登录号是AF3214370该基因可能编1iqe山230个氮基酸211成II`J},TlftII-)扶转移酶(GST)，将其与同源性较高的4个G

4、STcDNA进行氦Mm}PiJ;VI"I比较，表现JI较高的保守性。Southern杂交结果证明GST基因在碱莲从因组中'1iii有至少两个以_}二的拷贝;Northern杂交结果表明，400mMNaCl处理48h，幼叫'I'GSTmRNA的表达量是对照的2-3倍，说明碱蓬中GS7'11';1);}受。。诱导户厂我们建立了一个过量表达碱蓬cDNA文库的系统，用以进行」以南芥的大规模转化。过量表达载体日」pCAMBIA1200和pRT105组装If11成，使得cDNA文库丫}Camv35S启动子作用下过量表达。用cDNA插入J'两钡9的载体

5、引物进行PCR扩增，结果表明cDNA文库中至少94%的克隆含有。DNA插入丁J二。将过4}.}达文)钧沟混合质半U.经农杆菌介导用花序浸泡法进行拟南芥的遗传转化，在筛选的100.000粒种户}』获得500株潮霉素抗性苗，8株表现出特异表型。在T，代中，仅有20%的转}ltPII植株为中拷贝插入。转墓因棺株的PCR鉴定呈现阳侧，1七16l寸1,l",性分析iI*fl进行之中。关键词:活性氧胁迫、谷Il)L甘)a转移酶耐翩cDNAi:11ii表达文库、拟南芥、转基因植株分类号:Q78CloningandExpressionofGSTGeneo

6、fSuaedasalsaandTransformationofSuaedacDNAOver-expressionLibraryinArabidopsisSaltstressconsistsofosmoticandionicstress,thenthesecondarystresswhichiscalledoxidativestressfollowingtheformers.Theimpositionofenvironmentalstressleadstoincreasingproductionofreactiveoxygenspecies

7、(ROS)inplantcells,whichcandamageproteins,membranelipids,DNAandothercellularcomponents.Plantshaveevolvedprotectionmechanismswhichincludeenzymaticreactionsystemandno-enzymaticreactionsystem.Theenzymaticreactionsystemmainlyincludessuperoxidedismutase(SOD),catalase(CAT),gluta

8、thioneS-transferase(GST),glutathioneperoxidase(GOPX),ascorbateperoxidase(APX)andsoon.Glutathione