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1、红法夫酵母酶法提取条件研究讲究与敷讨食品,业斜枝Vol・2&No・o&2007红法夷酵母酶法提取条件研究曾子丹'，姚朔影(1广东省生产力促进中心，广东广州510070;2•广州市微生物研究所,广东广州510250)摘耍:红法夫酵母类胡萝1,_紊是胞内成分，首先耍对红法夫酵母进行破壁提取处理，通过单因素实验，确定了将B.circtdansA1.383一2胞壁溶解酶用于红法夫酵母破壁提取虾青素的条件,为最佳酶作用条件提供数据支持.关键词:红法夫酵母•虾青素，胞壁溶解酶中图分类号:TQ926.4文献标识码:A文章编号：1002—0306(2007)08—0091—03虾青素(astaxanthin)
2、,属于叶黄族xanthophyit类的酮式类胡萝卜素•虾青素具有极强的抗氧化性能，能吸收活性纯态氧而防止其它分子或组织被破坏，英抗氧化性能较维生素E强百倍以上•另一方面,类胡萝卜素作为重要的营养素来源，能增强机体免疫功能，防病保健,在医药，食品，饲料和养殖业方面用途广泛••红法夫酵母是一种能积累大量虾青素的红色酵母，是一种极具产业化前景的天然虾青素资源•虾青素是红法夫酵母的细胞内色素，由于酵母细胞壁很厚，而动物肠道不分泌降解细胞壁的酶类，所以摄入后难以消化吸收，同时对于虾青素的提取，不破壁则无法进行•因此，优化出高效的虾青素提取方法，对红法夫酵母虾青素进行开发利用及相关研究的开展具有重要意义•
3、前期通过诱变选育，得到虾青素含量比原株高82.9%的突变株PhaffiarhodozymaBCY2&红法夫酵母高密度培养条件的优化研究以酶提取法为出发点，在已获得一株稳定高产胞壁溶解酶的突变株环状芽抱杆菌B.circulansA1.383—2的基础上，对其产酶条件进行研究•由于酶作用过程受到温度,pH,加酶量以及作用时间的影响,因此为了达到最佳的酶作用效果,提高酵母破壁率及虾青素提取率，有必要通过实验来对各种影响因素进行探讨，为确定酶作用的最好条件提供数据支持.1材料与方法1.1材料与仪器红法夫酵母菌Phaffiarhodozy,maBCY28,环状芽收稿日期:2007—04—25作者简介:曾
4、子丹(1971一)，男,研究生，研究方向:食品生物技术的过程控制，实验计算机模型的设计构建.抱杆菌B.circulansA1.383—2本实验室选育保存;虾青素标样Sigma公司;法夫酵母菌体，酵母细胞壁自制;pH65的磷酸缓冲液.分光光度计，高效液相色谱仪，显微镜.1.2实验方法1.2.1发酵及菌体获取方法红法夫酵母一斜面活化一一代，二代摇瓶一5L发酵罐发酵一离心(4000i7rain)收集菌体一冷冻干燥一50°C干燥至恒重122胞壁溶解酶粗酶粉的制备环状芽抱杆菌一培养一离心(8000r/rain)一粗酶液一超滤浓缩一冷冻干燥一粗酶粉1.2.3酶活力的测定取配备后的酶反应混合液3mL,T30
5、qc温和振荡•间隔一定时间在600nm处测定吸光度.酶活力定义:在30qc,pH=6・5，反应60rain,使反应混合液吸光度值减少50%的,定义为20个活力单位.124二甲基亚枫破壁法•结果以T表示.1.2.5酶法破壁法取冷冻干燥所得红法夫酵母菌体1.5g,将其悬浮于粗酶液中，酶反应一段时问，以虾青素提取率为指标确定酶作用最佳条件•结果以T表示.1.2.6虾青素分析方法高效液相色谱法•流动相:乙氤:甲醇:水:5:1&2(v/v/v),流速0.5mL/min,柱温30〜C,PDA在波长48Ohm处进行检测•以标样进行定量分析.1.2.7计算虾青素提取率以下式表示：提取率(％)=T/Txl00%
6、2结果与讨论2.1酶作用pH对虾青素提取率的影响胞壁溶解酶是复合酶，包括:B…葡聚糖酶，蛋白酶，纤维素酶,淀粉酶，淀粉葡萄糖昔酶，几丁质酶，木聚糖酶，甘露聚糖酶•每种酶的最佳作用pH不尽相同，因此应寻求合适的pH有利于细胞壁的破碎.在体积为25mL,pH为4・0,4.5,5・0,5・5,6・0,6・5,7・0,7.5,8・0,&5粗酶液中分别加入1.5g红法夫酵母干菌体，控制酶作用温度为40qC,温和震荡反应30h后测虾青素提取率•结果如图1所示.由图1可知，当pH为5.5时，较有利于酶水解细胞壁•这是因为酶在不同酸碱介质中，会有不同厂三I野农品,业斜妓SdenceandV^echnolo〜o
7、fFoodlndustry100善.婿60鬟4020OpH图IpH对提取率的影响的解离状态，但一般在特定的状态下才有利于酶的催化反应・pH能影响到酶分子的结构，从而影响到决定酶专一性及活力的活性中心的性能;同时也影响了底物分子的离子化程度及其与酶间的亲和力.2.2加酶量对虾青素提取率的影响经优化过的培养条件培养环状芽抱杆菌所得粗酶液，测定其酶活为72.9u/mL,在1.5g红法夫酵母干菌体中加入不
