粳稻两系不育系7001s中抗稻瘟病基因的克隆和功能验证

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1、万方数据CloningofaBlastresistancegeneinJaponicatwolinqmalesterileline7001Satwo-linemalesterilelineandfunctionverificationByLiBinDirectedbyAssosciateProf．DengqimingADissertationSubmittedinPartialFulfillmentofRequirementsfortheDegreeofMasterSichuanAgricultureUniversityChengDuSichuan，China611130June，

2、2014万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：莲鹕少。￥年万月钐日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保

3、存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：孝椭导师签名：夕F璎叼q沙p年石月笋日≯。，仂年∥月矽日万方数据摘要水稻稻瘟病是由稻瘟病菌(Magnapotheoryzae)弓I起的，其为一种世界性的水稻病害，发病面积和造成的危害程度居水稻三大病害之首，每年给我国水稻生产带来不可估量的损失。综观目前各种防治手段，选用稻瘟病抗性品种是最直接有效的。但长期种植含单一抗源基因的抗病品种，随着病原菌和优势小种的变化其抗性和抗谱也会相应的降低，甚至可能完全消失。因此，鉴定和发掘更多的抗性资源，分离、克隆更多的抗性基因，从而很好的利用

4、这些新的抗性资源，通过将其导入到其他育种材料获得新的抗性品种就显得尤为重要，也成为现代稻瘟病抗性育种的主要目标。7001S是一个广谱抗稻瘟病的粳稻两用核不育系，其对来自全国不同稻作区的22株稻瘟病菌系均表现为高度抗性。通过构建7001S／80．4BF2群体的遗传分析和初步定位表明，F2分离单株对稻瘟病菌的抗性呈明显的抗、感双峰分布，抗病和感病植株分离比例符合3：1的理论比例，说明7001S对稻瘟病菌的抗性是由一对显性核基因或者一个显性的QTL位点来控制，并将该基因初步定位于第1l染色体长臂末端。进一步通过扩大遗传群体和分子标记开发，利用基于BSA的隐性群体分析技术进一步进行精细定位

5、，目前得到如下结论：l、目标基因定位在P21—2415和RM27322之间约310kb范围内，距两个标记的遗传距离均为0．13cM，并获得用于分子标记辅助选择的紧密连锁和共分离分子标记17．1、N22．550、N22．3600。2、绘制完成目标基因区域的精细遗传连锁图谱和物理图谱。3、通过在候选基因中寻找标记，同时结合候选基因的测序结果。最终确定3个候选基因，分别是LOC—Osll945980，LOC—Osll946200和LOC—Osll946210。LOC—Osl1945980编码NB—ARC类蛋白；LOC—Osl1946200编码LRR类抗病蛋白，对其蛋白质结构进行预测，发现

6、其含有一个ATP激酶结合位点和一个富亮氨酸重复序列结构域。LOCOsll946210也编码LRR类型抗病蛋白且与LOCOsll946200相邻。万方数据5、构建完成候选基因的干涉载体、过表达载体和互补表达载体，干涉受体材料为7001S，过表达和互补转基因受体材料为丽江新团黑谷(LTH)，对转基因植株在分子水平做了阳性鉴定，转基因效果明显，阳性率较高。6、对干涉转基因植株进行田间稻瘟病抗性鉴定，亲本7001S干涉转基因表现为感病。通过候选基因的定量PCR检测，干涉转基因植株中目标基因表达量下降。研究中涉及到的过表达和互补转基因植株已经获得，进一步的田间抗性鉴定和分子水平鉴定正在进行中

7、。综合研究成果，初步了解了抗性材料中的有关基因，为后续实验进一步开展该抗病基因的抗病机理研究，及其通过分子标记辅助选择手段来培育水稻抗病新品种等工作打下了良好基础。关键词：水稻稻瘟病抗性基因克隆功能验证万方数据AbstractRiceblastcausedbyMagnaporthegriseaisaworldwidericedisease．Itsincidenceareaandharmfullevelsisthefirstofthethreemajordiseases